マウス肝臓からの辺縁性肝白血球の単離

要約

出典:Sorski, L., et al.周辺性肝白血球の選択的収穫。J. Vis. Exp.(2016年)

このビデオでは、強制灌流によるマウス肝臓からの辺縁性肝白血球の単離を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスプロトコル

1. 肝臓の灌流とMH白血球の収集
   1. 8%イソフルランの過剰摂取で動物を安楽死させます。予防措置として、イソフルランに浸したパッドを含む15 mlチューブをマウスの頭の周りに置き、胸腔が開くまで置きます。
   2. マウスの手足をベッドに固定します。
   3. 呼吸が止まった直後に腹腔と胸腔を開いて肝臓と心肺複合体を露出させ、横隔膜の下部を無傷に保ちます(胸腔プールを排出します)。このプロセスによる出血を避けてください。
      1. 具体的には、内臓を傷つけずに下腹部の正中線点から切開を開始し、肋骨に向かって斜めに両側に進行し、胸腔上部まで切り込みます。
   4. 腸を引き出し、実験者の右側に動物の外に置き、門脈を露出させます。
   5. 蠕動ポンプに接続された30gの針を、脾静脈の門脈吻側に挿入します。
   6. 横隔膜の上の下大静脈を切断して、胸腔からの灌流液の排出と収集を可能にします。
   7. 蠕動ポンプを約3 ml /分の速度でオンにし、胸腔プールから血液で汚染された最初の3 mlの灌流液を静かに収集します。.
   8. この灌流液を捨てます。必要に応じて生理食塩水を使用してこのような洗浄を再度繰り返し、その後、肝臓灌流液の収集を開始します。
   9. 最大4 ml /分の速度で灌流を再開し、シリンジに接続されたバタフライを使用して胸腔から10 mlの灌流液を収集します。.
   10. 肝臓の色が薄茶色に変わったら、灌流を終了します。

>2. 白血球の抽出

1. 灌流液を400 x gで10分間遠心分離します。
2. 上清を吸引します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Autoclud蠕動ポンプ
バタフライニードル	オーエムジー		26グラム
バタフライニードル	オーエムジー		21G*3/4インチ
注射器	写真ソリューション		1ミリリットル
注射器	写真ソリューション		2.5ミリリットル
注射器	写真ソリューション		5ミリリットル
注射器	写真ソリューション		10ミリリットル
注射器	写真ソリューション		25ミリリットル
鈍いエッジの鉗子
鋏
止血
組織鉗子