出典:Hoffmann, S. H. L., et al., Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT. J. Vis. Exp. (2017)
このビデオでは、放射性同位体標識モノクローナル抗体を用いたTヘルパー細胞の細胞内放射性標識を非侵襲的陽電子放出断層撮影イメージングに実演します。
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方法論記事
放射性標識モノクローナル抗体を用いたマウスTヘルパーリンパ球の標識
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
1. cOVA-TH1細胞の放射性標識
>注:64Cu-DOTA-KJ1-26-mAbを培養cOVA-TH1細胞に適用して、細胞内放射性標識を可能にします。
- cOVA-TH1細胞の放射性標識では、線量キャリブレーターを使用して、放射性標識された64Cu-DOTA-KJ1-26-mAbをデッドボリュームのないシリンジに37 MBqを吸引します。1 mLの生理食塩水を加えて、37 MBq/mLの溶液を受け取ります。
- cOVA-TH1細胞を培地に2 x 106細胞/mLで懸濁し、48ウェルプレートの各ウェルに0.5 mLの細胞懸濁液を添加します。
- 調製したばかりの37 MBq/mL 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb溶液20 μLを48ウェルプレートの各ウェルに加えます。標識の最終比は、520 μLの容量で106細胞あたり0.7 MBqです。37°Cおよび7.5%CO2で30分間インキュベートします。
- インキュベーション後、各ウェルの細胞を慎重に再懸濁し、細胞懸濁液を48ウェルプレートから50 mLのスクリューキャップチューブに移します。細胞の損失を最小限に抑えるには、予め温めた培地で各ウェルをすすぎます。
- cOVA-TH1細胞懸濁液を400 x gで5分間遠心分離し、上清を廃棄し、10 mLの予熱PBSに細胞を再懸濁します。細胞計数のために細胞懸濁液のアリコートを除去します。洗浄手順を繰り返します。
- トリパンブルー染色により、適切な希釈液で生細胞cOVA-TH1細胞をカウントします。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 64Cuワークアップモジュール | WKL(英語 | カスタムメイド | 64Cu 生産 |
| 線量キャリブレーター | カピンテック | CRC-25Rの | |
| PETtraceサイクロトロン | ゼネラル・エレクトリック・メディカル・システムズ | ||
| DOTA-NHSの | マクロサイクリック | B-280 | |
| 抗cOVA-TCR抗体 (KJ1-26) | ハイブリドーマ細胞培養から単離 | DOTA活用形 | |
| Na2HPO4 | シグマ・アルドリッチ | 71633 | DOTA活用形 |
| H+ キレックス 100 | シグマ・アルドリッチ | C7901 | DOTA活用形 |
| アミコンウルトラ-15フィルターユニット | メルクミリポア | UFC910008 | DOTA活用形 |
| ロティプラン超純水 | カール・ロス | HN68.3 | DOTA活用形 |
| 酢酸アンモニウム | シグマ・アルドリッチ | 32301 | DOTA活用形 |
| PBSの | テュービンゲン大学 | DOTA活用形 | |
| Micro Bio-spin P-6 カラム | バイオ・ラッド | 7326221 | DOTA活用形 |
| クエン酸ナトリウム | シグマ・アルドリッチ | 71497 | DOTA活用形 |
| Cyclone Plus PhosphorImager | パーキン・エルマー | L2250116 | DOTA活用形 |
| DMEM | メルクミリポア | 102568 | T細胞培地用成分 |
| FCSの | メルクミリポア | S0115/1004B | T細胞培地用成分 |
| ピルビン酸ナトリウム | メルクミリポア | L0473 | T細胞培地用成分 |
| MEMアミノ酸 | メルクミリポア | K0293 | T細胞培地用成分 |
| ヘープス | メルクミリポア | L 1613 | T細胞培地用成分 |
| ペニシリン/ストレプトマイシン | メルクミリポア | A2212の | T細胞培地用成分 |
| 0.05 mM 2-β-メルカプトエタノール | シグマ・アルドリッチ | M3148 | T細胞培地用成分 |
| DO11.10マウス | 自社飼育 | TH1細胞培養 | |
| DPBSの | ギブコ | 14190144 | TH1細胞培養 |
| セルストレーナー 40 μm | コーニング | 352340 | TH1細胞培養 |
| ACKライジングバッファー | ロンザ | 10-548E | TH1細胞培養 |
| CD4マイクロビーズ、マウス | ミルテニーバイオテック | 〒130-097-145 | TH1細胞培養 |
| QuadroMACS セパレータ | ミルテニーバイオテック | 〒130-090-976 | TH1細胞培養 |
| LSカラム | ミルテニーバイオテック | 〒130-042-401 | TH1細胞培養 |
| 抗CD4抗体 (Gk1.5) | ハイブリドーマ細胞培養から単離 | TH1細胞培養 | |
| 抗CD8抗体 (5367.2) | ハイブリドーマ細胞培養から単離 | TH1細胞培養 | |
| 抗ラット抗体 (MAR18.5) | ハイブリドーマ細胞培養から単離 | TH1細胞培養 | |
| ウサギ補体MA | テブバイオ | CL3221 | TH1細胞培養 |
| 抗IL-4抗体 (11B11) | ハイブリドーマ細胞培養から単離 | TH1細胞培養 | |
| cOVA 323-339-ペプチド | EMCマイクロコレクション | カスタムオーダー | TH1細胞培養 |
| CPG1668-オリゴヌクレオチド | ユーロフィン MWG オペロン | カスタムオーダー | TH1細胞培養 |
| IL-2 | ノバルティス | 65483-116から07 | TH1細胞培養 |
| 96ウェルプレート | グライナー | 655180 | TH1細胞培養 |
| 24ウェルプレート | グライナー | 662160 | TH1細胞培養 |
| 細胞培養フラスコ | グライナー | 660175 | TH1細胞培養 |
| 48ウェルプレート | グライナー | 677 180 | 細胞のラベリング |
| ガンマセル1000 | 最高のセラトロニクス | お問い合わせ | |
| ガルメイRT225 | ガルメイ | お問い合わせ | |
| トリパンブルー | メルクミリポア | L6323 | in vitro評価 |
