マウスモデルからの鼠径部ドレナージリンパ節の採取

要約

出典:Rezende, R. M. et al., Visualizing Lymph Node Structure and Cellular Localization using Ex-Vivo Confocal Microscopy.J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオは、マウスモデルからの鼠径部ドレナージリンパ節の外科的分離手順を示しています。腹部を切開すると、鼠径リンパ節へのアクセスが可能になり、これは外科的に採取されます。採取した半透明の鼠径リンパ節は、免疫学的研究に使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 実験に使用したマウス

1. B6の背景に8週齢のオスとメスのマウスを使用します。

2. 鼠径部ドレナージリンパ節を切除する手術手順

1. CO₂窒息とそれに続く頸部脱臼を使用してマウスを安楽死させます。
2. アクリルステージ上でマウスを粘着テープで固定し、切開部周辺の毛皮の堆積を防ぐために、綿棒で腹部の皮膚にミネラルオイルを塗布します(図1B)。毛皮の除去は必要ありません。
3. マイクロサージェリー湾曲ハサミ(11.5 cm)とマイクロサージェリー湾曲鉗子(12.5 cm)を使用して、恥骨から剣状突起までの腹部に正中線切開を行います(図1C)。
4. 腹部の筋肉組織を皮膚から解離します(図1D)。
5. 垂直切開線の上部と下部に水平方向の皮膚切開を行い、目的の側(抗体ミックス注射の側に応じて)に皮膚フラップを作成し、皮膚をフラップしてリンパ節を視覚化します(図1E)。
6. アクリル板のスキンフラップをテープで固定します(図1F)。
7. マイクロサージェリー湾曲鉗子を使用して、鼠径部ドレナージリンパ節を切除します(図1F)。リンパ節は、皮膚の下に半透明の、通常は二葉状の球体として現れます。

結果

図1:鼠径リンパ節の準備
(A)FACS抗体マスターミックスの皮下注射を大腿部内へ。(B)注射後3時間後にマウスを安楽死させ、粘着テープでアクリル板上にマウスを固定し、腹部の皮膚に鉱物油を塗布して切開部周辺の毛皮沈着を防ぐ。(C)恥骨から剣状突起まで腹部の正中線切開を行います。(D)腹部の筋肉組織を皮膚から切り離し、皮膚フラップを行います。(E)アクリル板にスキンフラップをテープで貼り付けます。(F)マイクロサージェリー湾曲鉗子を使用して鼠径リンパ節を切除します。(G-H)臓器を培養皿(G)に入れ、臓器(H)を取り囲む脂肪を取り除きます。(

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
マイクロサージェリー湾曲鉗子	WEP手術器具	オーダーメイド	12.5センチ
マイクロサージェリーカーブハサミ	WEP手術器具	オーダーメイド	11.5センチ