ex vivoイメージングのためのマウス膝窩ドレナージリンパ節を採取するための解剖法

要約

出典:Rezende, R. M., et al.Ex-Vivo共焦点顕微鏡を用いたリンパ節の構造と細胞局在の可視化。 J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオは、マウスの後肢から膝窩ドレナージリンパ節を採取する解剖技術を示しています。リンパ節は、自然免疫と適応免疫の橋渡しに重要な役割を果たしており、組織構造と細胞生存率が維持された無傷のリンパ節を採取することで、局所免疫応答と全身免疫応答の研究に役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. 膝窩ドレナージリンパ節を切除する手術手順

1. CO₂窒息とそれに続く頸部脱臼を使用してマウスを安楽死させます。
2. アクリルステージ上の腹臥位にマウスを粘着テープで固定し、ふくらはぎと膝に綿棒で鉱物油を塗布します(図1A-D)。
3. ふくらはぎのかかとから膝まで正中線切開を行います(図1E、F)。
4. ふくらはぎの筋肉組織を皮膚から解離します(図1F、G)。
5. 膝窩を露出させます(図1G)。膝窩リンパ節は、膝窩窩に半透明球として現れます。
6. マイクロサージェリー湾曲鉗子を使用して膝窩リンパ節を切除します(図1G)。
7. あるいは、仰臥位でマウスを裏返し、膝窩LN除去のために大腿二頭筋と半腱筋の間の膝窩窩に近づき、かかと膝からふくらはぎの正中線切開を行い、続いてふくらはぎの筋肉組織を皮膚から解離させることにより、膝窩LN除去を行います
   手記：膝窩窩は、膝関節の後ろに位置する浅いくぼみです。膝窩リンパ節を見るために慎重に開きます。

結果

図1:膝窩リンパ節の準備。 (A、B)FACS抗体マスターミックスの肉球への皮下注射。(C,D)注射後3時間後、マウスを安楽死させ、粘着テープ(C)でアクリル板上にマウスを固定し(C)、腹部の皮膚に鉱物油を塗布して切開部(D)周辺の毛皮沈着を防ぐ。(E)ふくらはぎのかかとから膝まで正中線切開を行います。(F)膝窩を露出させます。(G)マイクロサージェリー湾曲鉗子を使用して膝窩リンパ節を切除します。(H)臓器をペトリ皿に入れ、臓器を囲む脂肪を取り除き、臓器をペトリ皿の中央に集中させ、臓器を繊細なタスクワイパーで覆い、温かい生理食塩水0.9%または1xPBSに浸し続けます。ペトリ皿を顕微鏡スロット...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
セルビュー培養皿	グライナー・バイオ	627861	35x10 mm、ガラス底部
キムワイプ	キムテックサイエンスブランド	7557	サイズ 21 x 20 cm / 100枚/箱
マイクロサージェリー湾曲鉗子	WEP手術器具	オーダーメイド	12.5センチ
マイクロサージェリーカーブハサミ	WEP手術器具	オーダーメイド	11.5センチ

名 メートル