方法論記事

結核菌に感染した単球由来細胞の完全分化型マクロファージ感染モデル

2025年7月8日

この記事について

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典: Mily, A., et al. Polarization of M1 and M2 Human Monocyte-Derived Cells and Analysis with Flow Cytometry upon Mycobacterium tuberculosis Infection. J. Vis. Exp.(2020年)。

このビデオは、ヒトのM1およびM2分極単球由来マクロファージにおける結核菌感染に対する応答を研究する方法を示しています。フローサイトメトリーを使用すると、感染したマクロファージ集団と非感染したマクロファージ集団に関連するさまざまな表面マーカーの研究が可能になります。

プロトコル

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 単球由来細胞のMtb感染

>注:次の手順はBSL-3施設で実行する必要があります。

  1. 結核菌(Mtb)ペレットを新しい滅菌50 mLチューブ内の無血清RPMI培地に再懸濁し、最終的な細菌濃度を約5 x 106 CFU / mLに調整します。
  2. 単球由来細胞を含む6ウェルプレートから細胞培養培地を取り出します。各ウェルに1 mLの無血清RPMI培地を加えます。ウェルあたり1 mLの細菌懸濁液を添加して、感染の多様性(MOI)を5:1、つまり2 mL/ウェル中の106マクロファージあたり5 x 106 CFUを取得し、プレートを37°Cおよび5%CO2で4時間インキュベートします。
  3. 感染後、細胞を1mLの滅菌洗浄バッファーで3回洗浄し、細胞外細菌を除去します。プレートを傾け、角から洗浄バッファー全体を慎重に取り外します。Mtb感染単球由来細胞を抗生物質を含まないRPMI完全培地2 mLに再懸濁し、フローサイトメトリー染色に進むか、フローサイトメトリーの前にさらに24時間(または他の時点)細胞をインキュベー
    4. トします。
....

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開示事項

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
8ウェルチャンバースライドラボテック154534
RPMIの1640ライフテクノロジーズ株式会社01 SH30096
IFN-γペプロテック300から02
Na-ピルビン酸GEヘルスケアライフサイエンス01 SH300239月
L-グルタミンGEヘルスケアライフサイエンス01 SH30034月
Falcon 6ウェルフラットボトムプレートコーニング ライフサイエンス353046
ウシ胎児血清(FBS)シグマ・アルドリッチF7524
GM-CSFのペプロテック300-03

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タグ

TLR 2 M1 M2

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