昆虫幼虫における細菌感染モデルを確立する技術

要約

出典:Asai, M., et al. Use of the Invertebrate Galleria mellonella as an Infection Model to Study the Mycobacterium tuberculosis Complex. J. Vis. Exp. (2019).

このビデオは、オオウガであるGalleria mellonellaの幼虫にMycobacterium bovis感染モデルを確立する方法を示しています。Mycobacterium bovis BCGの生物発光株を幼虫の血リンパに注入して感染を確立し、生物発光を所定の間隔で測定して感染の進行を研究します。

プロトコル

>注:以下に説明するすべての作業は、地域の健康と安全のガイドラインに従って、クラス2微生物学的安全キャビネット(MSC)内のCL2実験室で実施されます。

>1. M. bovis BCG luxの感染に対する調製

1. モントリオールのワクチン株であるM. bovis BCG luxの凍結1.2 mLグリセロール(15%)ストックを、ルシフェラーゼ酵素をコードするVibrio harveyiのluxAB遺伝子を運ぶシャトルプラスミドpSMT1で形質転換します。
2. 0.2%グリセロール、10%アルブミン、デキストロース、カタラーゼ(ADC)濃縮、および50μg / mLのハイグロマイシンを含む15 mLのMiddlebrook 7H9ブロスに、1.2 mLのBCG luxアリコートを解凍して、標識された250 mLの三角フラスコに接種します。.
3. フラスコを密閉されたバイオセーフティ容器に入れ、オービタルシェーカーインキュベーターで37°C、220rpmで72時間(または培養物が成長の中間ログ段階に達するまで)インキュベー
トします。
4. リン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH 7.4、0.01 Mリン酸緩衝液、0.0027 M....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1.5ml反応チューブ(エッペンドルフ)	エッペンドルフ	22431021
20、200、1000 μlのピペットとフィルター付きチップ	任意のサプライヤー	該当なし
24ウェル培養プレート	グライナー	662160
25mlピペットとピペットボーイ	任意のサプライヤー	該当なし
3コンパートメントシャーレ(94 / 15mm)	グライナー	637102
遠心機	任意のサプライヤー	該当なし
クラス II安全キャビネット	任意のサプライヤー	該当なし
ベントキャップ付き三角フラスコ(250 ml)	コーニング	CLS40183
エタノール (>99.7%)	VWRの	208221.321
ガレリア・メロネラ(250個入り)	ライブフードダイレクトUK	W250
グリセロール	シグマ・アルドリッチ	G5150
ハイグロマイシンB	コーニング	30-240CR
マイクロシリンジ (25 μl, 25 ga)	SGEの	3000
マイクロ遠心分離機	任意のサプライヤー	該当なし
ミドルブルック7H11寒天	BDバイオサイエンス	283810
ミドルブルック7H9スープ	BDバイオサイエンス	271310
ミドルブルックADCエンリッチメント	BDバイオサイエンス	212352
ミドルブルックOADCエンリッチメント	BDバイオサイエンス	212240
マイコバクテリウム・ボビス BCG lux	諸	該当なし
n-デシルアルデヒド	シグマ・アルドリッチ	D7384-100G
オービタル振盪インキュベーター	任意のサプライヤー	該当なし
リン酸緩衝生理食塩水	シグマ・アルドリッチ	P4417-100TAB
ポリソルベート80(Tween-80)	シグマ・アルドリッチ	P8074-500ミリリットル
スモールボックス	任意のサプライヤー	該当なし	暗い通気孔または非密封ボックスを推奨
ピンセット	任意のサプライヤー	該当なし	短くて細い先端/鈍い長いピンセット
ペトリ皿(94/15mm)	グライナー	633181
濾紙(94mm)	任意のサプライヤー	該当なし	フィットするようにカット

台