アジュバント誘発性関節炎マウスモデルの生成技術

要約

出典:Lu, Q., et al. Detecting Migration and Infiltration of Neutrophils in Mice. J. Vis. Exp. (2020).

このビデオは、マウスモデルでアジュバント誘発性関節炎を生成する方法を示しています。コンプリートフロイントアジュバント(CFA)は、マウスの足首関節および関節周囲領域に注入されます。CFAは免疫系を活性化し、好中球の浸潤や誇張された炎症を引き起こします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. アジュバント誘発性関節炎(AA)マウスモデルの誘導

1. 完全なフロイントアジュバント(CFA)を少なくとも5秒間ボルテックスして懸濁し、次に100μLの懸濁液をインスリン注射器に引き込みます><。 手記： 無菌性を確保するために、実験では全く新しいCFAを使用することをお勧めします。
2. 記載されているようにマウスを麻酔します。
3. 選択した足に印を付け、足首の関節スペースに20μLのCFAを注入します。選択した足の4つの関節周囲スポットに20μLの懸濁液を注入します(合計80μL)。
4. マウスを呼吸ユニットから取り外し、処理したマウスを新しいチャンバーに入れます。マウスが動く能力を取り戻すまで、マウスが呼吸していることを確認するためにマウスを監視します。
5. 3日ごとに、ポケット厚さ計を使用して足首関節の直径を測定し、関節の直径を評価します(図1A)。
6. 3日ごとに、関節炎のスコアリング基準(図1C)によって関節炎の重症度を評価します：0、正常、紅斑および腫脹の証拠なし、1、最も軽度の関節炎、足根骨または足首関節に限局した紅斑および軽度の腫脹、2、中等度の関節炎、足首から足根骨に広がる紅斑および軽度の腫脹、3、重度の関節炎、足首から中足関節に広がる紅斑および中等度の腫脹、4、 最も重篤な関節炎、紅斑、重度の腫脹には、足首、足、指、または四肢の強直症が含まれます。

結果

図1:アジュバント誘発性関節炎(AA)マウスモデルの代表的な結果。(A)足首関節の直径は、ポケット厚さ計を使用して測定しました。(B)関節の腫れは、足首関節の直径(n = 7)に基づいて評価されました。(C)各関節炎スコアの写真。(D)関節炎の重症度は、0〜4ポイント(n = 7)のスケールで等級付けされました。データは SD ±平均として表示されます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
15 mLコニカルポリプロピレン遠心チューブ	隼	14-959-53A
23 G x 1 1/4 "針	BDの	305120
26 G x 3/8インチ針	BDの	305110
30 G x 1/2 "ニードル	BDの	305106
コンプリートフロイントアジュバント、10 mg / ml	シグマ	1002036152
エッペンドルフマイクロチューブ、1.5 mL	シグマ	Z606340
ダイヤル厚さ計	ミツトヨ	7301
Shu Rui U40 ディスポーザブル滅菌インスリン注射針 1 mL	BDの	328421