同種骨髄移植および脾細胞移植によるマウスモデルにおける移植片対宿主病の誘導

要約

出典:Buchele, V., et al. 生きたマウスにおける腸移植片対宿主病の誘導とそのミニ内視鏡的評価。J. Vis. Exp.(2019年)。

このビデオは、同種造血幹細胞とGvHD誘導脾臓同種性Tリンパ球を使用して、致死放射線を照射したレシピエントマウスにおける腸移植片対宿主病、GvHDの誘導を示しています。このプロトコルは、疾患のメカニズムを理解し、革新的な治療オプションを開発するための重症急性腸GvHDモデルを確立するのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. GvHD導入

1. 0日目:レシピエントマウスの全体照射
   1. レシピエントとして、少なくとも10週齢の雌のCD45.2+ H2kd+ BALB/cマウスを使用してください。
   2. GvHD導入前にレシピエントマウスの体重を量り、記録します.
      手記：レシピエントの体重が20g以上であることを確認してください。開始時の体重は、GvHD の誘導と進行の過程で個々のマウスの体重減少を計算するための基準値として機能します。
   3. X線照射器の容器に最大5匹のマウスを入れます。
   4. マウスに全身放射線を照射し、8GyのX線を単回照射します。放射線源としてCs137を使用してください。
2. 1日目:照射マウスのT細胞枯渇骨髄の再構成
   手記： 同種骨髄細胞の移植は、セクション1.2で概説および詳述されているように、照射後24時間以内に行われるべきである。滅菌組織培養フードで以下に記載する手順を実行し、ろ過試薬を使用してください。同種CD45.1/Ly5.....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
BIOBEAM 2000 ガンマ線照射器	ガンマ・サービス・メイカル社
リン酸緩衝生理食塩水(PBS)	シグマ・アルドリッチ(株)	D8662-6x500ミリリットル
セムケン鉗子(長さ:13 cm、鋸歯状、湾曲した先端)	ファインサイエンスツール	11009から13
硬化ファインハサミ(長さ:8.5cm、ストレートチップ、刃先:24mm)	ファインサイエンスツール	14090から09
RPMI-1640 ミディア	シグマ・アルドリッチ(株)	R8758-500ミリリットル
皮下注射針(26G)	B.ブラウンメルズンゲンAG	4657683
1 mLシリンジ	B.ブラウンメルズンゲンAG	9166017V
50mLチューブ	ザルシュテット農業 & Co.KG	6,25,47,254
40 μmメッシュスクリーンを備えたセルストレーナー	BDファルコン	352340
インスリン注射器(滅菌内部付き)(30G)	BDの	324826
Pan T Cell Isolation Kit II, マウス	ミルテニーバイオテックGmbH	〒130-095-130	脾臓T細胞を単離するための磁石細胞分離
CD90.2 MicroBeads、マウス	ミルテニーバイオテックGmbH	〒130-049-101	T細胞が枯渇した骨髄細胞を単離するための磁石細胞分離
生検鉗子	KARL STORZ SE & Co KG	61071 ZJの	大腸内視鏡検査の実験セットアップの一部
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物(Na2EDTA)	カール・ロスGmbH & Co.KG	8043.2	ACK溶解バッファーの成分
Alexa Fluor 700 anti-mouse CD45.2 抗体 (clone: 104; lot: B252126;RRIDの番号AB_493731)	バイオレジェンド	109822
PE/Cy7 anti-mouse CD45.1 抗体 (clone: A20; lot: B217246;RRIDの番号:AB_1134168)	バイオレジェンド	110730
APC/Cy7 anti-mouse CD8a 抗体 (clone: 53-6.7, lot: B247008;RRIDの番号AB_312753)	バイオレジェンド	100714
フォラン/イソフルラン	株式会社アッヴィ	B506
濾過ウシ血清	パンバイオテック	品番40-47500	FACS緩衝液の成分

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