出典:Trevaskis, N. L., et al.腸間膜リンパ管カニューレ付きラットモデル:腸管リンパ薬物輸送の評価への応用。J. Vis. Exp.(2015年)。
このビデオは、ラットの腸間膜リンパ管をカニューレ挿入する技術を示しています。この方法により、リンパ液中に存在する全量の成分に直接アクセスできます。
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方法論記事
リンパ液を採取するためのラットモデルにおける腸間膜リンパ管カニューレ挿入
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1. 腸間膜リンパ管のカニューレ挿入
- 動物を右側をオペレーターに向けて置きます。必要に応じて、手術用顕微鏡の助けを借りずに手術を行います。
- 腹部筋壁の最上層を、正中線(剣状突起)から胸郭(肋骨縁)の約2cm下にある右側脇腹まで伸びる直線的な4cmの切開で開きます(図1Bを参照)。
- 腹筋壁の残りの層を、小さな手術用ハサミを使用して、正中線から右側4〜5mmの右側に開きます(図1Bを参照)。
- 小腸を左腹筋壁の下に引っ込め、通常の生理食塩水で飽和した滅菌ガーゼ2〜3枚を使用して所定の位置に保ちます。
- ラットの背中の下に右腎臓の高さで水平に配置された10mlのプラスチック注射器にラットをブリッジして、腸間膜リンパ管の視覚化を容易にします。
- 上腸間膜リンパ管を見つけます:右腎臓に垂直で、すぐに吻側で腸間膜動脈(脈動する暗赤色血管;図1Cを参照><)に平行な直径約0.5〜1mmの血管。 注:絶食していないラットまたは油を事前に投与したラットでは、血管は白く不透明で、非常に半透明の絶食ラットよりも視覚化が容易です。
- 大きな上腸間膜リンパ管と腸間膜動脈のすぐ尾側の領域を検査して、2番目の小さな副リンパ管が存在するかどうかを判断します。存在する場合は、管を切断して瞬間接着剤で閉塞するか、管の周りに縫合糸を結び、腸から流れるリンパ液の全量が上腸間膜リンパ管から収集されるようにして、管を通るリンパ の流れを遮断します。
- 一対のまっすぐな鉗子を、右腎臓の下縁にある腎周囲脂肪床に通し、大静脈のすぐ下の結合組織層を上腸間膜リンパ管と平行な方向に通過させます。
- 鉗子の先端を使用してリンパカニューレをつかみ、一方の端を腸間膜リンパ管に隣接させ、もう一方の端を右腎臓のレベルで動物から外出させて腎周囲脂肪床に引っ張ります。
- 鈍的解剖により、結合組織と脂肪組織の上にある層から腸間膜リンパ管を分離します。.リンパ管に穴を開けたり、傷つけたりしないように注意してください。
- リンパ管を分離した後、マイクロハサミ、宝石商の鉗子の鋭い先端、または25Gの針のいずれかでリンパ管に小さな穴を開けます。船が完全に切断しないように注意してください。
- リンパカニューレが抗凝固剤溶液(シリンジと25G針を使用)で完全に満たされており、エアギャップがないことを確認します。小さな鉗子の助けを借りて、小さな穴を介して腸間膜リンパ管の内側にリンパカニューレを約2〜4mm挿入します。
- リンパカニューレを数分間観察します。カニューレ挿入が成功した場合は、カニューレの自由収集端から腸リンパ液が徐々に流れるのを観察します。カニューレ挿入が成功しない場合は、手順1.8〜1.12を繰り返します。
- カニューレ挿入が成功した場合は、リンパ管の入り口の穴に獣医用接着剤を少し垂らしてカニューレを固定します。余分な獣医用接着剤を塗布して血管を閉塞しないように注意してください。.
- 獣医用接着剤が固まるのを待っている間、リンパの流れを数分間観察して、カニューレ挿入手順が成功したことを確認します。カニューレ挿入の成功を確認したら、腹腔内に配置されたガーゼ片を慎重に取り除き、小腸を元の位置に置きます。
- リンパ採取チューブを事前に計量し、リンパ液および血液サンプル採取用のチューブにラベルを付け、抗凝固剤溶液を追加します。十分な抗凝固剤溶液を添加して、滅菌水中のEDTA1 mg / ml、または採取したリンパ液または血液中のヘパリン10〜20 IU / mlの最終濃度を達成します。.
- 抗凝固剤(ステップ1.16)を含むリンパ採取チューブをカニューレの端に留置して、自由に流れるリンパ液を収集します。
- 次に、再水和液および/または製剤の注入のために十二指腸をカニューレ挿入します。
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結果
図 1.(A)リンパ管をカニューレ状にする準備のために腹部を剃ったところ、(B)正中線から右脇腹に向かってまっすぐに伸びる4cmの切開部で開いた腹筋壁をリンパ管に通じているところ、(C)右腎臓に垂直な上腸間膜リンパ管(黄色の丸部分)の写真。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 滅菌生理食塩水 | バクスターヘルスケア | AHB 1307 | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、バクスター100ml生理食塩水バッグ、50個入りの箱です |
| 水に70%エタノール | 任意 | どんなブランドでも使えます | |
| グルコン酸クロルヘキシジン溶液(Microshield 4) | リビングストン・インターナショナル | JJ60243L | どのブランドでも使用できます。http:// www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L |
| ベタジン溶液 | リビングストン・インターナショナル | BU0510 | どのブランドでも使用できます。http:// www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =BU0510 |
| イリウムケタミル(ケタミン100mg / ml) | プロベットビクトリア | ケータI.1 | http://www.provet.vom.au |
| ヘパリン(35000I.U.35mL中 | シグマファーマシューティカル | 337220 | http://www.sigmaco.com.au |
| ポリエチレン(PE)カニューレ 外径 0.96 mm x 内径 0.58 mm | マイクロチューブエクステンション | PE8050 | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、PEチューブ0.96 x0.58 mm、30 mです |
| ポリエチレン(PE)カニューレ o.d. 0.8 mm x 内径 0.5 mm | マイクロチューブエクステンション | PE9658 | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、PEチューブ0.8 x 0.5 mm、30 mです |
| マーカー | 任意 | どんなブランドでも使えます | |
| 動物用接着剤 | 任意 | どんなブランドでも使えます | |
| 23ゲージ針 | リビングストン・インターナショナル | DN23GX0.75LV | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、リビングストンの使い捨て針、滅菌、23GX0.75インチ、100 / BOXです。http:// www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV |
| 25ゲージ針 | リビングストン・インターナショナル | DN25GX1.0LV | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、リビングストンの使い捨て針、滅菌、25GX1.0インチ、100 / BOXです。http:// www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV |
| 1mlシリンジ | リビングストン・インターナショナル | T3SS01TA | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、テルモシリンジ1mlスリップツベルクリン100/ボックスです。http:// www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA |
| 10mlシリンジ | リビングストン・インターナショナル | T3SS10SA | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、テルモシリンジ10mlスリップ100/ボックスです。http:// www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA |
| ガーゼ綿棒 | リビングストン・インターナショナル | GSC075 | どのブランドでも使用でき、必要なサイズにカットできます。ここでの例は、綿を7.5x7.5 cm、8プライで充填したガーゼ綿棒です。http:// www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075 |
| ヒーティングパッド | ラテック | WT1 | 温度を37°Cに保つブランドなら何でも使用できます。ここでの例は、Ratekの保温トレイです。 |
| 手術用顕微鏡 | ツァイス | 495005-0014-000 | どのブランドでも使用できます。例えば、Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C、Stand S Double Spot、KL 300 LEDなどです。https:// www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143 |
| 1x小型手術用ハサミ | ファインサイエンスツール(FST) | 14060から09 | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、FSTファインハサミ、9 cm、刃先21 mm、シャープ、ストレートです。http://www.finescience.ca/ スペシャルページ/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17 |
| 鋸歯状の湾曲した先端を持つ2x鉗子 | ファインサイエンスツール(FST) | 11001-13 | どのブランドでも使用できます。ここでの例は、湾曲した2.8x1.4mmの先端を持つFST 13cm標準パターン鉗子です。http://www.finescience.ca/ スペシャルページ/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32 |
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