ラットモデルにおける頸動脈のカニューレ挿入

要約

出典:Trevaskis, N. L. et al., 腸間膜リンパ管カニューレラットモデル:腸管リンパ薬輸送の評価への応用 J. Vis. Exp. (2015)

このビデオでは、ラットモデルで左頸動脈をカニューレ挿入する外科的処置を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 頸動脈のカニューレ挿入

頸動脈カニューレ挿入術は、腸間膜リンパ管のカニューレ挿入の前または後に行うことができます。一部のオペレーターは、動物を動かすときにリンパカニューレが外れる可能性を減らすために、リンパ管をカニューレする前に頸動脈をカニューレすることを好みます。

斜角から
1. 2.5cmの頸動脈カニューレにマークを付け、動脈に挿入するチューブの部分を特定します。カニューレのもう一方の端(つまり、斜角なし)を、抗凝固剤溶液で満たされたシリンジに取り付けられた23または25-Gの針に接続し、カニューレに抗凝固剤溶液を充填して、エアギャップがないことを確認します。
2. カニューレ挿入を容易にするために、麻酔をかけたラットを背側横臥位に置き、首を伸ばし、頭をオペレーターに向けています。一部のオペレーターは、ラットの尻尾をオペレーターに向けてこの手法を実行することを好むことに注意してください。
3. 矢状面の気管の左上の皮膚層に1〜1.5cmの縦切開
を入れます。
4. 鈍い先端鉗子を使用して皮下結合組織を解剖し、下にある対になった首の筋肉を露出させます。
5. 首の筋肉を引っ込めて、左頸動脈(皮膚表面から~1 cm下に位置し、脈動している)を露出させます。鈍い解剖によって動脈から上にある結合組織をきれいにします。.
6. 鈍い組織鉗子を使用して、隣接する迷走神経管を損傷しないように注意しながら、動脈の~1cmの部分を慎重に分離します。これを行うには、鈍い先端の鉗子を動脈の両側に沿って垂直に開閉し、周囲の組織や迷走神経から解放します。
7. 細い先端の鉗子を使用して、頸動脈の下に2つの絹の縫合糸を通し、孤立した動脈セクションの両端に配置します。オペレーターに最も近く、ラットの心臓と鎖骨から最も遠い縫合糸を結びます(図1A)。
8. 動脈の下に一対の細い先端の鉗子を配置することにより、動脈を通る血流を遮断します(図1B)。
9. 細い先端の虹彩はさみを使用して、動脈の上面(孤立した領域の上部から約1/3)に小さな切開を入れます。動脈の表面にこぼれた血液をヘパリン食塩水で洗い流し、綿の先端で優しく拭きます。
10. カニューレの先端を一対の湾曲した先端鉗子で動脈に挿入します。挿入したら、血流を塞いでいるまっすぐな細い先端の鉗子を取り外し、カニューレを動脈内に保持して血液が漏れるのを防ぐための鉗子とカニューレを挿入するための2組の鉗子を使用して、カニューレを動脈内に2.5cm進めます。
11. 小さな動脈クランプを使用してカニューレを動脈内に保持し、ステップ1.8で動脈の下に配置されたまっすぐな細い先端鉗子を取り外して血流を閉塞します。
12. カニューレに抗凝固剤溶液を注入し、少量の血液を引き戻して、カニューレの開存性を確認します(図1C)。次に、カニューレを抗凝固剤溶液で洗い流し、ライターまたはカニューレプラグの炎を使用して端を密封します。
13. ステップ1.8で動脈の下に配置された2つの縫合糸でカニューレを所定の位置に結びます。
14. 動脈クランプを取り外し、動脈とカニューレの周りに3番目の縫合糸を固定します。首の傷を縫合糸で閉じます。

結果

図 1. (A)2本の絹の縫合糸で分離された頸動脈とオペレーターに最も近いものを結び付けたもの、(B)動脈の下に配置された一対のまっすぐな細い先端鉗子で分離された頸動脈と血流を閉塞したもの、(C)カニューレが所定の位置に留まり、少量の血液を採取して開存性を確認している頸動脈の写真。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
滅菌生理食塩水	バクスターヘルスケア	AHB 1307	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、バクスター100ml生理食塩水バッグ、50個入りの箱です
水に70%エタノール	任意		どんなブランドでも使えます
ヘパリン(35000I.U.35mL中)	シグマ・ファーマシューティカル	337220	http://sigmaco.com.au/
ポリエチレン(PE)カニューレ 外径 0.96 mm x 内径 0.58 mm	マイクロチューブエクステンション	PE8050	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、PEチューブ0.8x0.5 mm、30 mです
ポリエチレン(PE)カニューレ ød. 0.8 mm x i.d. 0.5 mm	マイクロチューブエクステンション	PE9658	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、PEチューブ0.96x0.58 mm、30 mです
ルーラー	任意		どんなブランドでも使えます
マーカー	任意		どんなブランドでも使えます
シガーライター	任意		どんなブランドでも使えます
23ゲージ針	リビングストン・インターナショナル	DN23GX0.75LV	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、リビングストンの使い捨て針、滅菌、23GX0.75インチ、100 / BOXです。http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV
25ゲージ針	リビングストン・インターナショナル	DN25GX1.0LV	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、リビングストンの使い捨て針、滅菌、25GX1.0インチ、100 / BOXです。http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
1mlシリンジ	リビングストン・インターナショナル	T3SS01TA	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、テルモシリンジ1mlスリップツベルクリン100/ボックスです。http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
10mlシリンジ	リビングストン・インターナショナル	T3SS10SA	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、テルモシリンジ10mlスリップ100/ボックスです。http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
ガーゼ綿棒	リビングストン・インターナショナル	GSC075	どのブランドでも使用でき、必要なサイズにカットできます。ここでの例は、綿を7.5x7.5 cm、8プライで充填したガーゼ綿棒です。http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
綿棒	リビングストン・インターナショナル	CTAST075DP	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、リビングストンのコットンアプリケータープラスチックダブルチップです。75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP
シルク縫合糸	リビングストン・インターナショナル	DTSK163019F4
メスの刃	ファインサイエンスツール(FST)	10020-00	どのブランドでも使用できます。ここでの例はFSTメスブレード#20です。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
メスのハンドル	ファインサイエンスツール(FST)	10004-13	どのブランドでも使用できます。ここでの例はFSTメスハンドル#4です。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1x小型手術用ハサミ	ファインサイエンスツール(FST)	14060から09	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、FSTファインハサミ、9 cm、刃先21 mm、シャープ、ストレートです。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
鋸歯状の湾曲した先端を持つ2x鉗子	ファインサイエンスツール(FST)	11001-13	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、湾曲した2.8x1.4mmの先端を持つFST 13cm標準パターン鉗子です。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
1x虹彩切除はさみ	ファインサイエンスツール(FST)	15000から08	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、FST Vannasスプリングはさみ-2.5mmカッティングエッジ、ストレートです。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16
1 x ストレート シート チップ付き鉗子	ファインサイエンスツール(FST)	11650-10	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、FST Graefe 10 cm ストレートで、先端が 1 x 0.99 mm の鋸歯状になっています。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32
滑らかでシャープなストレートファインチップを備えた1x鉗子	ファインサイエンスツール(FST)	11251から10	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、FST Dumont #5 鉗子 ストレート 11cm で、先端は 0.08 x 0.04mm です。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29
1 x 滑らかで細かい湾曲した鉗子を持つ鉗子	ファインサイエンスツール(FST)	11063から07	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、滑らかな0.4 x 0.3mmの先端を持つFSTデリケート鉗子9cmです。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360
1x縫合糸ニードルホルダー	ファインサイエンスツール(FST)	12001年13	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、長さ16mm×幅1.9mmの先端を持つFST 13cm Hasleyニードルホルダーです。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70
1x動脈クランプ	ファインサイエンスツール(FST)	18050-28	どのブランドでも使用できます。ここでの例は、FSTブルドッグSerrefinesストレート、長さ28mm、9x1.6mmの顎寸法で、ミディアムクランププレスです。http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82

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