角膜損傷を調べるための自己免疫性ドライアイラットモデルにおけるフルオレセイン染色

要約

出典:Hou Ahiua, et al.眼球組織中のエフェクターメモリーT細胞の増加を伴う慢性自己免疫性ドライアイラットモデル。J.Vis.エクスペーション (2017年)

このビデオは、ラットモデルで自己免疫性ドライアイ疾患の程度を評価するために、フルオレセイン色素を使用して損傷した角膜を染色する方法を示しています。染色されたコラーゲン繊維の緑色の蛍光スポットは、角膜上皮の損傷細胞を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ドライアイの特徴の評価

フルオレセイン染色で角膜の損傷を測定します。

1. 2 μL の 0.2% フルオレセインをラット角膜に加えます。手袋をはめた指でラットのまぶたを受動的に3回開閉して、フルオレセイン色素を眼の表面に広げます。
2. 1分後、3mLの注射器(針を取り付けない)で1mLの生理食塩水を引き出し、注射器を角膜の約2〜3 mm前方に配置し、生理食塩水を眼に静かに推進します。
3. 背景照明をオフにした状態で、眼球イメージング顕微鏡のコバルトブルーフィルター(つまり、~400 nm)で画像を取得します。
   手記：その後、画像は以前の出版物から変更された評価システムによって分析されました。次に、緑色の斑点の数、面積、および強度を0から2まで主観的に等級付けすることにより、画像を分析しました(0はそれらの不在を示し、1は50未満の斑点の点状染色を示し、2は50を超える斑点の点状染色を示します)。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
試薬
フルオレセインナトリウム溶液	ボシュロム U.K.リミテッド	NAの
備品
リングライトイルミネーターとカメラ付き実体顕微鏡	カールツァイス	NAの