マウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

要約

出典:Barthelmes, J. et al., マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導と、さまざまな組織における免疫細胞の疾患依存性分布の評価。J. Vis. Exp.(2016年)

このビデオは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質と不活性化結核菌の組み合わせを注入することにより、マウスモデルで実験的な自己免疫性脳脊髄炎を誘発する方法を示しています。このモデルにより、研究者は疾患のメカニズムを研究し、治療的介入をテストすることができます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 実験的自己免疫性脳脊髄炎または EAE モデル

1. EAEモデルの誘導
   1. EAEの誘導には、10〜13週齢の雌129S4/SvJae×C57BL/6マウスを使用してください。
   2. マウスに、脳炎誘発性MOG_35-55(ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質)ペプチド(200μg)を背中の上部と下部に皮下注射し、400μgの結核菌を含む200μlの完全フロイントアジュバント(CFA)で乳化します。
      手記：ネガティブで疾患を誘発しない偽コントロールとして、結核菌を含む不完全なフロイントのアジュバントを、同じ量で同じ経路で使用することができます。
   3. その後、24時間後に再びマウスに百日咳毒素の腹腔内注射を行います(合計0.2μg、200μlのリン酸緩衝生理食塩水、PBSで希釈)。未治療のマウスを対照群として用いると、罹患動物と健康な動物を比較することができる。
      手記：また、200〜300μgのMOG_35〜55ペプチド、CFA中の300〜500μgの結核菌、および0.2〜0.3μgの百日咳毒素を0.1〜0.2mlの注射液でEAEを誘導することも可能です。
   4. 注射の1週間後から、臨床症状についてマウスを毎日検査します(ステップ1.2.1を参照)
      手記：発症日は実験によって異なりますが、当研究室の条件では11日目頃ですので、ここでは14日目を発症3日後と定義しています。本研究のすべてのマウスが臨床症状を発症しました。

>2. マウスの採点

1. 臨床症状を臨床スコアで次のように分類します:0)徴候なし、0.5)尾の遠位麻痺、1)尾の完全な麻痺、1.5)しなやかな尾と後肢の軽度の脱力、2)しなやかなしっぽと後肢の重度の脱力、2.5)しなやかなしっぽと片方の後肢の麻痺、3)しなやかなしっぽと両後肢の麻痺、 3.5) 両後肢の麻痺と片方の前肢の脱力(このスコアを達成したマウスは、地域の倫理ガイドラインに従って安楽死させられた)。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
EAEキット	Hooke Laboratories、ローレンス、米国	EK2110