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空腸凍結切片における房状細胞の可視化のための免疫蛍光法

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典:Mizutani, Y. et al., 自由浮遊マウス空腸切片における腸房細胞の可視化のための抗リン酸化ギルジン抗体の使用。J. Vis. Exp. (2018年度)

このビデオは、自由浮遊マウス空腸切片の腸房細胞を可視化するための免疫蛍光法を示しています。腸絨毛内では、管腔先端に緑色の蛍光が広がり、赤い細根の塊が広がっていることは、房状細胞の存在を示しています。

Protocol

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動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 事前準備

  1. リン酸緩衝生理食塩水(PBS)10 Lを調製する:リン酸水素ナトリウム32.27 g(Na2HPO4・12H2O)、リン酸二水素ナトリウム4.5 g(NaH2PO4・2H2O)、塩化ナトリウム(NaCl)80.0 gを超純水に最終容量10 Lまで添加する溶液を室温(RT)で保存する。
  2. 200 mLのPBS-Tを調製します:ステップ1.1から200 mLのPBSを100 μLのポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテルとともに、最終濃度0.05%(vol:vol)まで調製します。RTで保管してください。
  3. 手袋と目の保護具を着用しながら、10%緩衝中性ホルマリン溶液に50mLの15%スクロースを準備します:7.5 gのスクロースを10%緩衝中性ホルマリン溶液(材料表)に添加して、最終容量50 mLにします。.RT.
    で保存 注意：10%緩衝中性ホルマリン溶液中のホルムアルデヒドを吸入および/または皮膚/眼に接触させると、危険な場合があります。取り....

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Results

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figure-results-1
図1:凍結切片の形態学的保存のための空腸切片のゼラチン充填
(A)マウス空腸にゼラチンを管腔内充填する手順の写真 (A1)腸壁を貫通しないように、18ゲージのまっすぐな針の斜めの先端を取り外しました。 (A2)緩衝中性ホルマリン溶液(10%)をクリップした空腸の一端に注入して腸の内容物を洗い流し、腸内腔表面を固定しました。 (A4)既存の縫合糸の結び目(黒い矢印)の間にさらに4つの縫合糸の結び目(白い矢印)を配置すると、3つの短いピースが得られました。次に、組織は指定された 2 つの位置 (白い矢印)<.......

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Disclosures

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利益相反は宣言されていません。

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Slc:DDY 6週齢の雌マウス中部化学紙財該当なし
リン酸水素二ナトリウム 12- 水 (Na2HPO412H2O)和光〒196-02835
ジヒドロエンリン酸ナトリウム二水和物(NaH2PO42H2O和光〒199-02825
塩化ナトリウム(NaCl)和光〒199-10665
トリトンX-100、ポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル片山化学工業該当なし
蔗糖和光〒190-00013
10%緩衝中性ホルマリン溶液武藤化学工業20215ステップ1.3。
ファロイジン-蛍光色素コンジュゲート、Alexa Fluor 594 ファロイジンサーモフィッシャーサイエンティフィックA12381 (英語)
メタノールナカライ・テスク21915-35
DAPI(4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール、二塩酸塩)サーモフィッシャーサイエンティフィックD1306
N.N-ジメチルホルムアミド(DMF)ナカライ・テスク13015-75
ウシ血清アルブミンシグマA9647-10Gの
18ゲージステンレス鋼ストレートニードルテルモNN-1838R
U.S.P. 6-0, 60 cm ナイロンカット縫合糸, クラウンジュン河野製作所該当なし
22ゲージ翼付き針テルモSV-22DLKの
テルモシリンジ 20mLテルモSS-20ES
50 mL遠心チューブTPPとは91050
いわき遠心チューブ15mLいわき〒2325-015
1.5mLマイクロ試験管星RSV-MTT1.5
ゼラチンパウダー、ジェラールブラン新田バイオラボ2809
凍結組織検体用包埋コンパウンド O.C.T. コンパウンド 118 mL 12 個さくらファインテック4583
クライオモールド クライオディッシュ No.3 125個 ウェルサイズ 20×25×5 (mm)シューイワークス1101年3月
イソペンタンナカライ・テスク26404から75
ファルコン細胞培養ディッシュ 35 x 10mm イージーグリップコーニング353001
抗原賦活化液濃縮液、ターゲット賦活化液 pH9 10xダコS2367ステップ4.2.2の抗原賦活化溶液濃縮物。
プロテインブロックダコX09094.2.5のブロッキングソリューション。
Phospho-Y1798 girdin (pY1798)抗体と関連製品免疫生物学研究所(IBL)=X社28143ステップ4.2.6のリン酸化Y1798ガージン抗体。
ヤギ抗ウサギIgG(H+L)高交差吸着二次抗体、Alexa Fluor 488サーモフィッシャーサイエンティフィックA11034 (英語)
Aquous封入剤、Prolong Gold 退色防止封入剤サーモフィッシャーサイエンティフィックP36930
カバースリップ、松波マイクロカバーガラス 22×22mm 100個 厚さNo.1松波ガラスC022221
Entellan New、キシレンベースの顕微鏡用封入剤メルクミリポア107961
MASコーティングスライドガラス ホワイト松波ガラスMI-MAS-01
木製マッペ KOタイプシューイワークス〒99-40007
イマージョンオイル 518 F 蛍光フリー 20 mlツァイス444960
ピペット、ピペットマンP(P2、P20、P200、P1000)ギルソンF144801、F123600、F123601、F123602
超純水製造装置アドバンテックGS-590
プラスチック手袋、スターニトリル手袋星RSU-NGVM
クライオスタットライカマイクロシステムズCM1950
ディープフリーザー SANYO Ultra Low三洋電機MDF-382
ショーケース冷蔵庫日本冷凍庫NC-ME50EC
ウォーターバス サーモミンダー SDminiN(ゼラチンを50°Cで溶解する)タイテック0068750から000
ハイブリダイゼーションインキュベーター(50°Cでの抗原賦活化用)タイテックHB-100
免疫染色用インキュベーションチャンバーコスモバイオ10DO
免疫組織化学用レシプロシェーカー(室温用)タイテックNR-1
免疫組織化学用レシプロシェーカー(4C用)東京 リカ機械MMS-3010
実体顕微鏡(ティッシュハンドリング用)オリンポスSZ61
実体顕微鏡(図1B用)ライカマイクロシステムズM165FC
蛍光顕微鏡(図3用)ニコンE800
共焦点レーザー走査型顕微鏡ツァイスLSM700
) 年度 の 名 名 の の の

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