微小電極アレイに結合した3次元神経回路網の構築

要約

出典: Tedesco, M., et al., Interfacing 3D Engineered Neuronal Cultures to Micro-Electrode Arrays: An Innovative In Vitro Experimental Model. J. Vis. Exp. (2015)

このビデオは、海馬ニューロンを持つ平面微小電極アレイに結合した3Dニューロン培養の発達を示しています。単離されたニューロンは、微小電極アレイの活性領域上に2Dネットワークを形成し、メンブレンインサートを備えたマルチウェルプレート内のガラスマイクロビーズに付着します。これらのニューロンでコーティングされたマイクロビーズを電極に移すと、それらは相互接続された3Dニューラルネットワークに組織化されます。

プロトコル

サンプル採取を含むすべての手順は、研究所のIRBガイドラインに従って実行されています。

1. 胚の解剖と組織の解離

1. 動物施設内の定期的な明暗スケジュール(午前7時から午後7時)の下で、一定の温度(22±1°C)および相対湿度(50%)で成体の雌ラット(200〜250 g)を飼育します。食料と水が自由に入手できることを確認してください。
2. 3%イソフルランを使用して、発生の18日後(E18)に妊娠中の雌ラットに麻酔をかけます。.次に、頸椎脱臼によって動物を犠牲にします。
3. 各ラットの胚から海馬を取り出し、Ca²⁺およびMg²⁺を含まない氷冷ハンクのバランスの取れた塩溶液に入れます。発生の18日目では、海馬と皮質の組織は非常に柔らかく、細かく切る必要はありません。詳細については、こちらをご覧ください。
4. 0.05%のDNAseを含む0.125%のTrypsin/Hank's溶液で組織を37°Cで18〜20分間解離します。
5. パスツールピペットで上清溶液を取り除き、10%ウシ胎児血清(FBS)を含む培地を5分間加えて酵素消化を停止します。
6. FBSで培地を取り出し、サプリメントの入った培地、1% L-グルタミン、ゲンタマイシン10 μg/mlで一度洗浄し、パスツールピペットで培地を再度取り出し....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ラミニン	シグマ・アルドリッチ	L2020	0.05μg/ミリリットル
ポリ-D-リジン	シグマ・アルドリッチ	P6407	0.05μg/ミリリットル
トリプシン	ギブコ	25050-014	0.125% HBSS で 1:2 希釈 (カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含まない
DNAアーゼ	シグマ・アルドリッチ	D5025	ハンクス溶液で0.05%希釈
神経基礎	ギブコ Invitrogen	21103049	培地
B27	ギブコ Invitrogen	17504044	2%ミディアムサプリント
ウシ胎児血清(FBS)	シグマ・アルドリッチ	F-2442	10%
グルタマックス-I	ギブコ	35050038	0.5 mM
ゲンタマイシン	シグマ・アルドリッチ	G.1272	5mg /リットル
ポリジメチルシロキサン(PDMS)	コーニングシグマ	481939	硬化剤とポリマー
微小電極アレイ	マルチチャネルシステム(MCS)	60MEA200/30-TI-PR	MEAと:電極グリッド8x8;電極の間隔と直径はそれぞれ200と30μm。糸なしのプラスチックリング
マイクロビーズ	Distrilab-デュークサイエンティフィック	9040	1grガラス部品サイズ標準40μm
トランズウェル	共演者シグマ	CLS 3413	メンブレンインサート付きマルチウェルプレート(直径6.5mm、多孔質0.4μm)
HBSS w\o カルシウムイオンとマグネシウムイオン	ギブコ Invitrogen	14175-052
ハンクスバッファー溶液	シグマ	H8264-J
鼠	スプレイグ・ドーリー	ウィスターラット

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