マウスのアストロサイトを分離して培養する簡単な技術

要約

出典:Wolfes, A. C., et al., Culturing In Vivo-like Mouseine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol. J. Vis. Exp. (2018)

このビデオは、他の脳細胞から分離してマウスの星状細胞を培養する簡単な方法を示しています。培養時には、アストロサイト特異的培地を使用し、非アストロサイト細胞の接着を阻害することにより、アストロサイトを選択的に培養します。これらの培養アストロサイトは、微細なプロセスで星状の形態を示します。

プロトコル

サンプル採取を含むすべての手順は、研究所のIRBガイドラインに従って実行されています。

1. ラットまたはマウスの脳の解剖

>注:マウスとラットの両方を使用できます。P8より古い動物も使用できますが(P12までテストしました)、髄膜の除去はますます困難になります。さらに、高齢の動物の脳細胞は、組織の解離中に切断する可能性のある複雑なプロセスと接続を形成し、細胞死の増加につながるため、細胞収量と健康が減少します。ここでは皮質調製物について説明しますが、他の脳領域も使用できます。

1. 0.05%トリプシン-EDTAを37°Cの水浴に入れます。
2. 動物(E19の子犬の場合は妊娠中のラット、またはP0-P8動物の妊娠ラット)をゆっくりと上昇させ、脳を隔離して安楽死させます。次の手順では、滅菌技術が必要です。
3. 胚組織を扱う場合は、まず子宮から胚を取り出して胚嚢を開き、すぐにハサミで頭を切り落とします。すべてのヘッドが切断されたら、予冷した解剖媒体に移します。
   1. 頭を培地に沈めたら、鉗子で皮膚と頭蓋骨(どちらも若い動物では非常に柔らかい)を開き、小脳をつまみます。脳の残りの部分を慎重に持ち上げて頭蓋骨から取り出します。
      手記：

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.05%トリプシン-EDTA	ギブコ	25300054	使用前に37°Cのウォーターバスで温め
0.25%トリプシン-EDTA	ギブコ	〒25200-056	使用前に37°Cのウォーターバスで温め
B-27サプリメント	ギブコ	17504-044	50倍ストック
グルタマックス	ギブコ	35050-061	100倍ストック
ペニシリン/ストレプトマイシン	ギブコ	15070-063	50ストック;ペニシリン:5000U/ml;ストレプトマイシン:5000μg/ml
神経基礎媒体	ギブコ	21103049	L-グルタミンなし
DMEM	ギブコ	41966029
HBEGFの	シグマ	4643
ヘープス	ギブコ	15630080
HBSSの	ギブコ	14170112
FCSの	ギブコ	10437028
PBSの	ギブコ	10010049	1倍
100μmナイロンセルストレーナー	BDの	352360
トリパンブルー	シグマ	T8154
細胞培養インキュベーター	サーモフィッシャーサイエンティフィック	Hera Cell 240i細胞培養インキュベーター
実験用シェーカー	ハイドルフ	ロタマックス120	細胞培養インキュベーター内で使用
遠心機	エッペンドルフ	5810 R

てください てください の 名