出典:Tsui, Y., et al. 成熟シュワン細胞の生成のためのソースとしての骨髄由来前駆細胞の低酸素プレコンディショニング。J. Vis. Exp. (2017年)
このビデオは、多能性骨髄間質細胞(BMSC)からシュワン細胞様細胞を得る方法を示しています。最初に、BMSCは低酸素治療を受け、続いてニューロン前駆細胞への指向性分化が行われます。続いて、特定の培地および培養条件を用いて、これらの前駆細胞のシュワン細胞様細胞への形質転換を誘導する。
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方法論記事
骨髄間質細胞からのシュワン細胞様細胞の生成
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
サンプル採取を含むすべての手順は、研究所のIRBガイドラインに従って実行されています。
1. ラットMSC培養物の調製
- 大腿骨からのMSCの収穫
- すべての解剖ツール(すなわち、微細解剖ハサミ、先端が鈍い切断ハサミ、歯付き鉗子)を180°Cで少なくとも2時間オートクレーブしてから使用してください。
- 15% ウシ胎児血清 (FBS) とペニシリン/ストレプトマイシン (P/S、1% v/v) を添加した最小限の必須培地 - α 修飾 (αMEM) からなる MSC 増殖培地を調製します。
- ペントバルビトンの過剰摂取(240 mg / kg体重、腹腔内)による若いオスのSprague Dawleyラット(体重200-250 g)を犠牲にします。.
手記：異なるラットの骨髄サンプルは別々に処理する必要があります。 - 犠牲にされた動物を仰臥位に置きます。腹部と下肢を70%エタノールで徹底的に洗浄します。
- 細かい解剖ハサミと鉗子を使用して、太ももの内側の皮膚と皮下組織を取り除きます。大腿骨が露出するまで、大腿部の筋肉を円周方向に取り除きます。膝と股関節が見えるまで、これを近位および遠位に続けます。先端が鈍い切断はさみを使用....
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結果
図1:MSCコロニーの設立。 かなりのMSCコロニーは、骨髄細胞を組織培養プラスチックに播種してから6〜7日後に見えるはずです。ラットMSCコロニーの代表的な画像が示されていますが(A)、ヒトのコロニーも同様の外観を示しています。コロニーは10日目に通過できます。より高い倍率で見ると、ラット(B)とヒト(D)の両方のMSCは、継代後に特徴的な線維芽細胞様の形態を示します。高い継代数で維持されたMSCは、平坦な四角形の形態(C)を獲得し、廃棄する必要があります。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| αMEM | シグマアルドリッチ | M4526 | |
| DMEM/F12 | サーモフィッシャー科学 | 〒12400-024 | |
| FBSの | バイオセラ | FB-1280/500 | |
| B27 | サーモフィッシャー科学 | 17504-001 | |
| 上皮成長因子(EGF) | サーモフィッシャー科学 | PHG0313 | |
| 塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF) | ペプロテック | 100-18B/100UG | |
| 血小板由来成長因子-AA(PDGF-AA) | ペプロテック | 100-13A | |
| ヘレグリンβ-3、EGFドメイン(β-Her) | ミリポア | 01-201 | |
| ポリ-D-リジン(PDL) | シグマアルドリッチ | P7886-1G型 | |
| ラミニン | サーモフィッシャー科学 | 23017015 | |
| ペニシリン/ストレプトマイシン(P / S) | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 15140-122 | |
| TrypLEエクスプレス | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 〒12604-013 | |
| 接着培養用10cmプレート | TPPとは | 93100 | MSCの選定に使用 |
| 接着培養用の6ウェルプレート | TPPとは | 92006 | 継代後のMSCの増設に使用 |
| 非接着培養用のUltraLow 6ウェルプレート | コーニング | 3471 | 神経前駆細胞の濃縮に使用 |
| 対ヒトCD90(Thy-1) | BDバイオサイエンス | 555593 | |
| 対ヒトCD73 | BDバイオサイエンス | 550256 | |
| 反ヒト/ネズミ STRO-1 | R&Dシステム | MAB1038 | |
| 抗ヒトCD45 | BDバイオサイエンス | 555480 | |
| 低酸素チャンバー | ビラップス・ローテンバーグ | MIC-101 | |
| HEPESバッファー | シグマアルドリッチ | H4034-100G(英語版) | |
| 反人間ネスティン | R&Dシステム | MAB1259 | |
| 抗ラットCD90(Thy-1) | BDバイオサイエンス | 554895 | |
| 抗ラットCD73 | BDバイオサイエンス | 551123 | |
| 抗ラットネスチン | BDバイオサイエンス | MAB1259 | |
| 抗ラットCD45 | BDバイオサイエンス | 554875 | |
| 抗S100β | ダコ | Z031101 | |
| アンチp75 | ミリポア | MAB5386 | |
| アンチGFAP | シグマアルドリッチ | G3893 | |
| 抗クラスIII-βチューブリン(Tuj-1) | コーヴァンス | MMS-435Pの | |
| 反人間核 | ミリポア | MAB1281 |
