方法論記事

コンパートメント化されたマイクロ流体デバイスを用いた神経幹細胞のニューロンへの分化

2025年7月8日

この記事について

要約

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出典: Paranjape, S. R., et al. Compartmentalization of Human Stem Cell-Derived Neurons within Pre-Assembled Plastic Microfluidic Chips. J. Vis. Exp. (2019)

このビデオは、マイクログルーブバリアによって分離された体細胞と軸索コンパートメントで構成されるマイクロ流体デバイスを使用して、神経幹細胞(NSC)の分化を示しています。NSCは体細胞コンパートメントに導入され、接着することができます。NSCは体細胞コンパートメント内でニューロンに分化し、微小溝バリアを介して軸索コンパートメントに軸索を伸ばします。

プロトコル

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>注:図1A、Bは、メインチャネルまたはコンパートメント、ウェル、およびマイクログルーブの位置を含む、事前に組み立てられた環状オレフィン共重合体(COC)チップの概略図を示しています。コンパートメント化されたチップは、食品着色料の単離によって実証されるように、コンパートメント内に明確な流体微小環境を確立できます(図1C)。

1. hSCニューロン用マルチコンパートメントチップのコーティング

>注:図2Aは、コーティング手順の概要を示しています。

  1. ポリ-L-オルニチンを細胞培養グレードの蒸留水に溶解して、20 μg/mLのワーキング溶液のチップあたり600 μLの溶液を調製します。
  2. ウェルからチップを調製した後に残った残りのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を吸引します。吸引するときは、ピペットの先端がチャネル開口部から離れていることを確認してください.
    手記：マイクロ流体チャネルは、この手順全体にわたって充填されたままにする必要があります。チャネル/コンパートメントから液体を吸引せず、ウェルからのみ吸引してください。

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結果

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図1:組み立て済みのCOC、マルチコンパートメントマイクロ流体チップ(A)上部と下部のウェルを識別するチップの図面。チップのサイズは75mm×25mmで、標準的な顕微鏡スライドのサイズです。(B)チャネルとチャネルを分離するマイクログルーブを示すズームイン領域。(C)この写真は、食品着色料を使用して各コンパートメント内に分離された微小環境を作り出していることを示しています。

figure-results-2
図2:プラスチックコンパートメント化された.......

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開示事項

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利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
完全神経幹細胞培地:
レックHU EGF
10 UGバイオソース(TM)		サーモフィッシャーサイエンティフィックPHG031420ng/mL
REC HU FGF BASIC
10 UGバイオソース(TM)		サーモフィッシャーサイエンティフィックPHG002420ng/mL
GlutaMAX サプリメント (100倍)サーモフィッシャーサイエンティフィック350500612mM
ノックアウトDMEM/F-12サーモフィッシャーサイエンティフィック12660012
StemProニューラルサプリメントサーモフィッシャーサイエンティフィックA10508012%
カルシウムとマグネシウムを含まない Gibco DPBSサーモフィッシャーサイエンティフィック14190144
ギブコ ヒューマン NSC (H9) キット コンボキットギブコN7800200
Gibco ラミニンサーモフィッシャーサイエンティフィック23017015
ガラスパスツールピペットシグマ・アルドリッチCLS7095D5Xシグマ長さ5.75
H9由来HU神経幹細胞
1E6細胞/バイアル;1ミリリットル		サーモフィッシャーサイエンティフィック510088
hibernate-EミディアムサーモフィッシャーサイエンティフィックA1247601
インキュベーター、5% CO2 37 °C
フロスティ氏サーモフィッシャーサイエンティフィック〒5100-0001
神経分化培地100mLあたり。
抗生物質-抗真菌薬(100x)サーモフィッシャーサイエンティフィック152401121mL(100倍)
アスコルビン酸シグマ・アルドリッチA8960200mM
BDNFのサーモフィッシャーサイエンティフィックPHC707440 ng/mL
Gibco B27 Plus サプリメント (50X)フィッシャーサイエンティフィックA35828012mL(50倍)
Gibco CultureOne サプリメント (100X)フィッシャーサイエンティフィックA33202011mL(100倍)
Gibco ニューロバサル プラス ミディアムフィッシャーサイエンティフィックA3582901
StemPro Accutase 細胞解離試薬サーモフィッシャーサイエンティフィックA1110501
XCプレコートXona Microfluidics, LLCXCプレコートXonaChipsに含まれています
XonaチップXona Microfluidics, LLCXC450長さ450μmのマイクログルーブバリア
加湿器トレイXona Microfluidics, LLC加湿器トレイ
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