オリゴデンドロサイト馴化培地の生成方法

Abstract

出典:Mazuir, E., et al.共培養実験用のオリゴデンドロサイトおよびオリゴデンドロサイトコンディショニング培地の生成。J. Vis. Exp.(2020年)

このビデオは、オリゴデンドロサイト系統細胞からオリゴデンドロサイトコンディショニング培地(OCM)の生成を、培地への分子放出を促進するためにストレスを与えることによって示しています。成長因子、サイトカイン、その他の生理活性分子が豊富なこの培地をニューロン培養物に添加することで、オリゴデンドロサイト分泌因子がニューロンの生理機能や接続性に及ぼす影響についての知見を得ることができます。

Protocol

1. OL系統(OL)細胞の採取と培養

>注:これらの手順は、無菌条件下で層流フードで実行する必要があります。

1. 振とうした翌日に、表1に従ってボッテンシュタイン・サトウ(BS)培地を準備します。
2. コーティングされたペトリ皿を滅菌蒸留水で3回すすぎます。
3. 主にOL系統細胞を含むフラスコの上清を採取し、いくつかのミクログリア細胞も含み、コーティングされていない100mmシャーレにプレートします.
   手記：このステップにより、皿表面への差動高速接着により、ミクログリア細胞を除去できます。
4. ペトリ皿を加湿インキュベーターで37°C、5%CO₂未満で15分間インキュベートします。
5. 各T150フラスコに25 mLの温かく調製した培地を入れ、加湿インキュベーターで5% CO₂の37°Cで2回目の振とうまでインキュベートします。
6. ペトリ皿から上清を新しいコーティングされていない100mmペトリ皿に移し、残留ミクログリア細胞の接着を可能にします。
7. ペトリ皿を加湿インキュベーターで37°C、5%CO₂未満で15分....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
B27サプリメント	サーモフィッシャー	17504044
D-(+)-グルコース溶液	シグマ	G8769
ダルベッコのモディファイドイーグルミディアム	サーモフィッシャー	31966021
エタノール 100%	シグマ	32221-メートル
エタノール 70%	VWRケミカルズ	83801.36
子牛胎児血清	サーモフィッシャー	10082147
神経基礎	サーモフィッシャー	21103049
ペニシリン-ストレプトマイシン	サーモフィッシャー	15140122
カルシウムとマグネシウムを含まないリン酸緩衝生理食塩水	サーモフィッシャー	A1285601
ポリエチレン(PEI)	シグマ	P3143
ボッテンシュタイン・サトウ(BS)メディア
apo-トランスフェリンヒト	シグマ	T1147
BSA(ウシ血清アルブミン)	シグマ	A4161(英語)
ダルベッコのモディファイドイーグルミディアム	サーモフィッシャー	31966021
インスリン	シグマ	I5500
PDGFの	ペプロテック	AF-100-13A
ペニシリン-ストレプトマイシン	サーモフィッシャー	15140122
プロゲステロン	シグマ	P8783
プトレシン二塩酸塩	シグマ	P5780
亜セレン酸ナトリウム	シグマ	S5261
T3 (3,3',5-トリヨード-L-チロニンナトリウム塩)	シグマ	T6397
T4(L-チロキシン)	シグマ	T1775
ツール
0.22μmフィルター	ザルトリウス	〒514-7010
1 mLシリンジ	テルモ	1611127
100mmシャーレ	ダッチャー	193100
15mLチューブ	コーニング ライフサイエンス	734-1867
50mLチューブ	コーニング ライフサイエンス	734-1869
60mmシャーレ	ダッチャー	67003