新生児マウス脳からの混合グリア細胞培養物の取得

この記事について

要約

ビデオは、新生児マウスの脳から細胞を分離して培養する方法を示しました。これには、脳の酵素的および機械的解離が含まれ、続いてニューロン成長因子を欠く成長培地で培養して、混合グリア集団が得られました。

プロトコル

動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

1. 混合グリア文化の成長

生後1〜2日の子犬を5.5インチの操作ハサミですばやく斬首し、頭をすぐに氷上の50mLチューブに入れます。この斬首は安楽死のモードであることに注意してください。
層流フードで、4.5インチのまっすぐなマイクロ解剖はさみを使用して、頭蓋骨と髄膜に小さな切開を行います。尾側の端から吻側の端(鼻)まで切断を開始します。斬首によって形成された開口部を使用して、皮膚の下に入ります。
1. 切開後、半球の1つを横に剥がします。次に、湾曲したピンセットまたはフック状のピンセットを使用して、脳全体を取り除きます。
0.25%トリプシン-エチレンジアミン四酢酸(EDTA)を含む新しい50 mLチューブに脳を37°Cの水浴で15分間浸します。脳あたり2mLのトリプシン-EDTAを使用します。.
新鮮な成長培地(10%ウシ胎児血清(FBS)、ダルベッコの改変イーグル培地/栄養混合物F12(DMEM / F12)、1%ペニシリン/ストレプトマイシン、1%L-グルタミン、1%ピルビン酸ナトリウム、および1%非必須アミノ酸)で脳を洗浄します培地を追加および除去します。これを4回繰り返します。
各脳に....

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号
DMEM/F12 (1:1) (1倍)	ライフテクノロジー	11330057
ピルビン酸ナトリウム	ライフテクノロジー	11360070
MEM 非必須アミノ酸 (100x)	ライフテクノロジー	11140050
L-グルタミン (100x)	ライフテクノロジー	25030081
EDTAの	フィッシャーサイエンティフィック	AM9260G
ウシ胎児血清	シグマ	13時間469
0.25%トリプシン-EDTA	ライフテクノロジーズのギブコ	25200

分

この記事について