胚のひよこの脳からの小脳スライスの取得

要約

出典:Hanzel, M., et al. Ex Vivo Culture of Chick Cerebellar Slices and Spatially Targeted Electroporation of Granule Cell Precursors. J. Vis. Exp. (2015).

ビデオは小脳スライスの準備を示しています。ニワトリの胚から小脳を分離するための詳細な手順を示しています。次に、スライスを解剖した小脳から組織チョッパーを使用して調製し、さらなる実験的分析を行います。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 鶏胚の解剖 14日目 (e14) 小脳

1. 褐色受精鶏の卵を38°Cで胚14日目までインキュベートします。
2. 卵はさみを使用して、卵でひよこの胚を斬首し、氷冷リン酸緩衝生理食塩水(PBS)を含むシャーレに頭を移します(図1A)。
3. 標準的な鉗子を使用して、各目の後ろに組織全体を切開し、目と上顎を切除します。咽頭全体を通して2回目の切開を行い、下顎を切除します(図1B)。
4. 標準的な鉗子を使用して、頭蓋骨の表面からすべての皮膚を剥がして(図1C)、前頭骨と頭頂骨を取り除き、脳を露出させます。
5. 腹側から、咽頭軟骨と補助間葉を取り除きます。
6. 背側からは、間葉を後脳に対して背側に慎重に取り除き、軟膜を傷つけないように注意しながら、脳全体を分離します(図1D)。
7. 中脳と後脳の間の組織全体を切開し、小脳を含む後脳を分離します(図1E)。
小
8. 脳と後脳の鼻翼板の両側接合部で組織全体を切開することにより、小脳全体....

結果

図 1.E14ニワトリ胚からの小脳の解剖。(A)卵の中のひよこを斬首し、氷冷したPBSを入れたシャーレに頭を移します。目の後ろと咽頭(破線)を切開して下顎と目を切除します。(B)頭蓋骨の表面から皮膚を取り除きます。(C)前頭葉と頭頂骨を取り除き、(D)脳を周囲の間葉と軟骨から取り出します。(E)解剖顕微鏡下で、脳の後端にある小脳の位置を特定します。中脳と後脳(破線)の間を切断して、小脳と腹側後脳を残します。(F)小脳の側方接合部(脚)に切開を行い、小脳を後脳から分離します(破線)。(G)小脳の腹側から脈絡叢(アスタリスク)を取り除き、小脳全体が無傷で視膜が付着するまで残します。ティッシュチョッパーでスライスを調製する前に、小脳を氷冷HBSSに移します。

....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
マキルウェインティッシュチョッパー	ミックル研究所エンジニアリング株式会社		最良の結果を得るには、300μmでカットします。