マウス脳からの内側視床-前帯状皮質スライスの生成

要約

出典:Lu, H., et al.マウス脳スライス調製における発作様活動の直流刺激と多電極アレイ記録。J. Vis. Exp.(2016年)

このビデオは、マウスの脳から内側視床前帯状皮質(MT-ACC)スライスの準備を示しています。マウスの脳を解剖し、MT-ACC経路を露出させるために切開を行い、ビブラートームを使用してスライスを生成します。その後、MT-ACCスライスは酸素化された人工脳脊髄液に保持されます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 脳スライスの準備

1. 4-8週齢の雄のC57BL/6Jマウスを使用してください。エアコン完備の部屋(21-23°C、湿度50%、12時間/12時間のライト/ダークサイクル、8:00 AM点灯)に動物を収容し、餌と水を無料で利用できます。
2. 人工脳脊髄液(aCSF)の250mlのアリコートを取り、氷の入ったビーカーに入れます。同時に、95%の_O2と5%の_CO2で構成される連続ガスを供給します。
3. 手術
   1. ガラスの箱に4%イソフルランを入れて動物に約3分間麻酔をかけます。動物が外科的な麻酔深度に達したら(つま先のつま先をつまむ反応がないことが示されます)、砕いた氷で満たされた浅いトレイに置き、ハサミで頭を取り除きます。
   2. 頭蓋骨を露出させ、残りの筋肉を切り取ります。次に、ロンゲールを使用して、頭蓋骨の背側表面を脳から剥がします。ロンジャーを使用して頭蓋骨の側面を切り取ります。すべての手術器具を75%エタノール溶液で滅菌します。
   3. へらを使用して、脳の腹面に沿って嗅球と神経接続を切断し、脳を切除します。斬首後、氷冷酸素化aCSFで満たされたビーカーに脳を迅速に移します。
4. 内側視床(MT)-前帯状皮質(ACC)脳スライスの調製
   手記：MT から ACC への経路を含むスライスを準備します。
   1. 各半球の正中線から2.0mm外側の2つの矢状カットで脳ブロックを手でカットし、皮質下の解剖学的構造を表示します。次に、2つの角度のあるカットを行います。最初のクロスカットを線条体の目に見える繊維路と平行にします。
   2. 小脳と視覚野の間の接続から、腹側で視床帯回経路に平行な前交連と視路の中点まで、2 番目のクロスカットを行います。
   3. シアノアクリレート接着剤で脳ブロックを角張ったプレート(~120°)に取り付け、経路のターニングポイントのすぐ上に切り込みを入れます。プレートを広げて平らにし、ビブラトームのチャンバーステージに接着します。
   4. 内側視床-ACC脳スライス(厚さ500μm)を作成し、氷冷した酸素化aCSFに浸します。スライスを記録チャンバーに移し、酸素化aCSFを含む連続灌流(12 mL/分)で32°Cに1時間保持します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
麻酔剤：
イソフルラン	ハロカーボンプロダクツ株式会社	NDCの12164-002-25	4%
aCSF(合計:1L):
D(+)-グルコース	メルク	1.08337.1000	10 mM
炭酸水素ナトリウム	メルク	1.06329.0500	25メートル
塩化ナトリウム	メルク	1.06404.1000	124 mM
(+)-L-アスコルビン酸ナトリウム、>=98%	シグマ	A4034-100Gの	0.15 g / 2 cc(約2 cc)
硫酸マグネシウム、無水、ReagentPlus	シグマ	M7506-500G	2 mM
塩化カルシウム二水和物	メルク	1.02382.1000	2 mM
リン酸二水素ナトリウム一水和物	メルク	1.06346.1000	1 mM
塩化カリウム	メイ&ベイカー株式会社、ダゲナム、イングランド	MS 7616	4.4メートル

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