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微小電極アレイを用いたマウス脊髄切片における神経回路の評価

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典:Iredale, J. A., et al. Recording Network Activity in Spinal Nociceptive Circuits Using Microelectrode Arrays. J. Vis. Exp. (2022).

このビデオは、マウス脊髄切片のニューロンネットワーク活動を研究するための微小電極アレイベースのアッセイを示しています。まず、スライスの表在性後角(SDH)からの電気生理学的活動が記録されます。次に、カリウムチャネル阻害剤を導入して脱分極を延長し、ニューロンネットワーク全体で同期したリズミカルな活動をもたらします。

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

サンプル採取を含むすべての手順は、研究所のIRBガイドラインに従って実行されています。

1. in vitro電気生理学

  1. 脊髄切片の調製と記録のための溶液の調製
    1. 人工脳脊髄液
      手記：人工脳脊髄液(aCSF)は、界面インキュベーションチャンバーで使用され、記録開始まで、および実験中に薬物の灌流剤および希釈剤としてスライスが保存されます。詳細な構成については、表1を参照してください。
  2. 118 NaCl、25 NaHCO3、10グルコース、2.5 KCl、1 NaH2PO4、1 MgCl2、および2.5 CaCl2を含むaCSFを調製します。これには、CaCl2を除く上記の必要量を2 Lの蒸留水に加えます。
  3. 上記の溶液をカルボゲン(95%O2、5%CO2)で5分間泡立て、CaCl2.
    を加えます 手記：このステップにより、CaCl2の沈殿が防止され、溶液が曇らないようにする....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
図1:脊髄スライスの向き、取り付け方法、切断方法。 (A)横方向のスライスには、支持溝が切り込まれた発泡スチロールの切断ブロックが必要です。脊髄は支持溝のブロックに寄りかかっており、コードの背側はブロックの反対側を向いています。ブロックとコードは、シアノアクリレート接着剤で切断ステージに接着されます。(B)矢状スライスは、切断ステージにシアノアクリレート接着剤の細い線を配置し、次に接着剤の上に脊髄をその側面に配置することによって調製されます。(C)水平スライスは、切断ステージにシアノアクリレート接着剤の細い線を置き、次に脊髄腹側を下にして接着剤の上に配置することによって調製されます。

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
利益相反は宣言されていません。

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
4-アミノピリジンシグマ・アルドリッチ275875から5G
100%エタノールサーモフィッシャーAJA214-2.5LPLの
CaCl2 1Mバンクシア・サイエンティフィック0430/1L
カルボノックス(カルボゲン - 95%O2、5%CO2)コアガス219122
湾曲したロングハンドルスプリングはさみファインサイエンスツール15015-11
カスタムメイドのエアインターフェースインキュベーションチャンバー
ウシ胎児血清サーモフィッシャー10091130
フォーセプスデュモン#5ファインサイエンスツール11251から30
グルコースサーモフィッシャーAJA783-500G
馬の美容液サーモフィッシャー16050130
倒立顕微鏡ツァイスアクシオバート10
KClのサーモフィッシャーAJA383-500G
ケタミンセバKETALAB04
大型手術用ハサミファインサイエンスツール14007-14
Loctite 454インスタント接着剤ボルトと工業用品L4543Gの
MATLABMathWorksのR2018bの
MEA、3次元マルチチャネルシステム60-3DMEA100/12/40iR-Ti、60-3DMEA200/12/50iR-Ti60個の窒化チタン(TiN)電極と1個の内部参照電極が8x8の正方形グリッドに整理されています。電極の直径は12μm、高さは40μm(100/12/40)または50μm(200/12/50)で、等間隔に100μm(100/12/40)または200μm(200/12/50)の間隔があります。
MEAヘッドステージマルチチャネルシステムMEA2100-HS60
MEAインターフェースボードマルチチャネルシステムMCS-IFB 3.0 マルチブート
MEAネットマルチチャネルシステムアラHSG-MEA-5BD
MEA灌流システムマルチチャネルシステムPPS2
MEA、平面マルチチャネルシステム60MEA200/30iR-Ti、60MEA500/30iR-Ti60個の窒化チタン(TiN)電極と1個の内部参照電極、8x8の正方形グリッド(200/30)または6x10の長方形グリッド(500/30)のいずれかに編成されています。電極の直径は30μmで、等間隔に200μm(200/30)または500μm(500/30)の間隔があります。
MgCl2サーモフィッシャーAJA296-500G
顕微鏡カメラ動機Moticam X Wi-Fiの
マルチチャンネルアナライザーソフトウェアマルチチャネルシステムV 2.17.4
Multi Channel ExperimenterソフトウェアマルチチャネルシステムV 2.17.4
NaClサーモフィッシャーAJA465-500G
NaHCO3サーモフィッシャーAJA475-500G
NaH2PO4サーモフィッシャーACR207805000
ロンゲールファインサイエンスツール16021-14
小さな春ばさみファインサイエンスツール91500から09
小さな手術用ハサミファインサイエンスツール14060から09
蔗糖サーモフィッシャーAJA530-500G
瞬間接着剤シアノアクリレート系接着剤
テトロドトキシンアブカムAB120055
除振テーブルニューポートVH3048W-オプト
振動ミクロトームライカVT1200 S
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Microelectrode ArrayNeuronal NetworkMouse Spinal CordSuperficial Dorsal HornPotassium Channel Inhibitor4 AminopyridineAction Potential RecordingElectrophysiological ActivitySynchronous Rhythmic ActivityArtificial CSF Perfusion

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