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動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1. VEP電極の埋め込み
- ケタミン(75 mg / kg)とメデトミジン(0.5 mg / kg)の腹腔内注射で動物に麻酔をかけます.
手記：麻酔導入後、離脱反射(ピンチテスト、角膜および眼瞼反射など)とそれらがないことを観察し、手術を開始するための指標として観察します。手術中、動物を継続的に監視し、反射がある場合は追加の麻酔薬(補充ごとに初期ケタミン用量の10%)を投与します。実験には成体ラット(>12週)を使用します。
- 手術部位の皮膚を剃ります。手術中に体温を維持するために、動物を加温パッド(37°C)に置きます。ポビドンヨードの局所塗布を通じて肌を準備します。外科用ドレープを適用します。全身麻酔下での角膜の乾燥を防ぐために、局所眼科用軟膏を塗布します。.無菌器具を使用して無菌を維持します。
- 頭の皮膚の正中線に縦方向の皮膚切開を行います。結合組織をクリアにして、頭蓋骨の露出を良好にします。
- マイクロハンドドリルを使用して、ブレグマの後ろ7 mm、正中線の横3 mmに小さなバリ穴を手動で慎重にドリルします。
- 頭蓋骨を通って皮質(領域17)にスクリュー電極を埋め込み、皮質を約0.5mmの深さまで貫通させます。歯科用セメントを塗布してネジを包み込み、固定します(必ずしも必要ではありません)。
- 頭の皮膚を縫合し、抗生物質軟膏を皮膚に投与し、動物が加温パッドで麻酔から回復するのを待ちます><。
注:または、電極を露出させたままにして、録音のたびに皮膚を再度開く必要がないようにすることもできます。手術を中止した直後、麻酔薬の回復前に、非ステロイド性抗炎症薬 (NSAID) (術前に投与されていない場合) またはオピオイド鎮痛薬を投与します。動物が麻酔薬から完全に回復し、歩行できるようになるまで、動物を常に監視してください。
- VEP記録の前に、動物が手術から回復するまで少なくとも1週間かかります。
2. VEP録音
- 動物に麻酔をかけ、皮膚を1.1および1.2.
として準備します
注:電気生理学的記録には、低用量の麻酔薬を使用できます(ケタミン40 mg / kgおよびメデトミジン0.25 mg / kg)。
- ネズミを暗い部屋に置き、5〜30分間暗闇に適応させます。場合によっては、ラットは暗所視に暗順応O/Nであったり、明所視VEP記録に光に適応したりすることがあります。
- 直腸体温計プローブを備えたホモエオサーミックブランケットシステムにより、体温を37±0.5°Cに維持します。
- 1.0%トロピカミド点眼薬で瞳孔を拡張します。頭蓋骨の上の皮膚を開き、事前に配置されたin situスクリュー電極にアクセスします。
- 刺激された目の反対側の視覚野にネジを接続し、基準ネジをアンプに接続します。針電極をアースとしてテールに挿入します。電極インピーダンスを測定し、5kΩ未満に維持します。
- ミニガンツフェルド刺激装置をまぶたの周りの皮膚に直接配置して、優れた目の分離を提供します。刺激装置の照明は、光度計によって事前に較正する必要があります。
- 1 Hzの周波数で100回の光の点滅を通じて光刺激を照射し、低バンドパスフィルター設定と高バンドパスフィルター設定をそれぞれ100 Hzに設定します。信号のサンプリングレートは5kHz.
です
注:信号は、各サイクル中に2つ以上のサンプルが収集されるように、少なくとも約250〜300Hzでサンプリングする必要があります。
- 皮膚を縫合し、麻酔から回復するために動物を温めパッドの上に保ちます。個々の動物に繰り返し記録して、一定期間の機能変化を監視できます。