海綿体内圧を測定するためのラットの海綿状神経刺激の実施

要約

出典:Hox, M., et al. ラットの海綿状神経刺激と海綿体内圧の記録。J. Vis. Exp.(2018年)。

このビデオは、海綿体内の血圧変化を研究するために、麻酔をかけたラットの海綿体神経の分離と刺激を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 外科手術のためのチューブ、電極、器具の準備

1. 次の顕微手術器具を使用してください:外科用ハサミ、角度付きマイクロハサミ、組織鉗子、デュモン#7および#5湾曲マイクロ鉗子のペア、マイクロニードルホルダー、およびリトラクター><。 手記：これは急性の手順であるため、器具を滅菌する必要はありません。使用後は、70%エタノールで先端を清掃して拭いてください。
2. チューブを70%エタノールに浸し、使用前に滅菌0.9%NaClと100 U/mLヘパリンで洗い流してください。システムに気泡が入らないように、チューブを充填したままにしておきます。
3. 20〜30 cmのポリエチレン(PE)-50チューブをカットして、海綿体内圧(ICP)測定用のカテーテルを作成します。圧力の減衰を減らすために、チューブをできるだけ短くしてください。
4. 滅菌済みの24G針を左右に曲げて、針が真ん中で折れるまで曲げます。ベベル付きのピースをPEチューブの遠位端に接続して、陰茎のcrusに挿入します。残りの半分をハブに挿入して、圧力トランスデューサーに接続します。ヘパリン化生理食塩水(100 U/mL)をシステムに充填します。
5. バイポーラテフロン被覆電極を作成するには、2本の125μm銀線を同じ長さに切断します。テープを使用してワイヤーをテーブルの端に取り付け、それらを通します。次に、電極を黒いプレートに取り付けます。
6. テフロンに小さな切開を行い、#5マイクロ鉗子を使用して、電極の先端から長さ4〜5mmのテフロンコーティングを剥がします。メスで先端を切り落とすと長さが均一になり、メスの刃の鈍いエッジの周りで端を曲げてフックを作成します。
7. フックが上を向くように、端が黒いプレートの端にわずかに伸びるように電極をテープで留めます。プラスチックプレートにシリコン接着剤を10秒間混合し、フックから1〜2mmの電極に接着剤の泡を巻き付けます。
8. 使用する前に約5分間乾燥させてください(図1)。刺激装置に接続できるように、もう一方の端の長い部分からテフロンを剥がします。
   手記：遠位端のフックをやり直すと、電極を何度も再利用できます。

2. 動物の準備

1. 動物に麻酔をかけた後、腹部、首、会陰の下半分を剃ります。動物を70%アルコールでこすり洗いし、続いてポビドンヨードを3回こすります。ラットを加熱した手術パッドの上に仰臥位に置きます。獣医の目の軟膏を塗布し、麻酔を2.5%イソフルランと0.8 L / min酸素をキャリアとして使用したノーズコーンに切り替えます><。 手記：イソフルランと酸素のレベルを調整して、麻酔の許容レベルを達成します。

3. 術前準備

1. 手術用顕微鏡で手術の全容疑を行ってください:3.15倍から20倍までの倍率で十分です。手術中は手袋を使用し、清潔な環境を維持してください。ネズミをカーテンの上に置きます。

>4. ICP測定のための坐骨海綿体筋解剖

1. メス、まっすぐなはさみ、およびDumont#7湾曲したマイクロ鉗子を使用して、陰茎の基部のレベルから始まり、下向きに伸びる正中線に対して5mmの横方向に1cmの垂直皮膚切開を行います(図2A)。Qチップを使用して、陰嚢の外側の筋膜を慎重に分離します(図2B)。筋膜を解剖した後、リトラクターを取り付け、綿の先端のスワップで触診して坐骨結節を見つけます(図2C)。
2. この点の内側の脂肪組織を解剖し、坐骨海綿体筋が視覚化されます(図3A)。デュモン#7湾曲マイクロ鉗子のペアを使用し、筋肉を縦方向に分離します。チュニカ・アルブギネアは明るい白い構造として現れます(図3B)。マイクロ鉗子とマイクロハサミを使用して、チュニカアルブギネアを適切に露出させ、その経過を確認します(図3C)。
3. システムの設定をキャリブレーションした後、チューブを会陰部の皮膚に挿入し、陰茎のcrusと平行に通っていることを確認します(図4)。ラインを所定の位置に残し、切開部を生理食塩水で湿らせます。

5. 刺激のためのCN解剖

1. 最初にメスを使用して、皮膚から2cm低い正中線の腹部切開を行い、次にまっすぐなハサミとマイクロ鉗子を使用します。膀胱と前立腺を露出させるために、白濁線とその下にある筋肉組織に沿って筋膜を通る一致する切開を作成します。
2. リトラクターを使用して、良好な露出を達成します。綿先スワブを使用して前立腺を脂肪組織から分離し、前立腺の背外側を走る主要な骨盤神経節(MPG)と海綿状神経(CN)を明確に視覚化します(図5)。
3. MPGとCNを視覚化した後、角度付きのマイクロハサミでMPGから2〜5mm遠位の神経を覆う筋膜を慎重に切開します(図6a)。#5マイクロ鉗子を使用して、神経の両側とその下に組織を広げて4 mmの長い部分を解放し(図6b)、9-0縫合糸を神経の下にスライドさせます(図6c)。
4. 縫合糸(図7a)を使用して神経をわずかに持ち上げ、バイポーラ電極のフックを神経の周りに配置しやすくします(図7b)。アシスタントに、2成分シリコン接着剤をインスリン針の先端と5秒間混合させます。神経を乾かし、フックと神経の周りの領域に接着剤を塗布します(図7c、d)。接着剤を乾かすために、電極を約1分間わずかに引っ張って神経を上昇させます。
5. 電極が引っ張られたりねじれたりしないように、右側のリトラクターを除いて、リトラクターを取り外します。露出した臓器を生理食塩水で濡らし、切開部に生理食塩水に浸したガーゼを敷きます。

6. ICP測定のための海綿体カニューレ挿入

1. リトラクターを使用してtunica albugineaの視覚化を復元します。リトラクターを坐骨海綿体筋に取り付けないように注意してください。
2. 針を取り付け、チューブをヘパリン化生理食塩水で洗い流してから、アルブギネア内膜に導入します。デュモン#7湾曲したマイクロ鉗子を片手(非ドミナント)で使用して、アルブギネア内膜とその上にある残りの筋肉を挿入点から遠位に保持し、アルブギネア内膜を伸ばしたままにします。もう一方の利き手でまっすぐなマイクロ鉗子で針を持ち、海綿体のコースと平行に導入します(図8)。
3. 針を海綿体に5〜8mm押し込みます。チューブを洗い流し、クラを押してラインをテストします(図9)。漏れがないことを確認してください。誤ってラインを引っ張らないように、チューブをテープでテーブルに固定します。リトラクターを取り外します。

>7. CNの刺激

1. 記録プログラム(Spike 2など)を実行するときは、海綿体内および平均動脈圧を継続的に記録します。
2. CN刺激用の刺激装置(SD9 Grass Instruments、材料の表を参照)に次のパラメータを設定します:電流1.5 mA、周波数16 Hz、電圧3 V、パルス幅5 ms。刺激の間に最低1分間の休息を挟んで50秒間の刺激を適用します。
   手記：通常、最初の刺激は反応の低下をもたらします(図10)。

結果

図 1.バイポーラテフロンコーティングされた銀電極。(A)コーティングされた電極とコーティングされていない電極の間の遷移ゾーンに気泡を接着します。(B)電極の遠位2cmをしっかりと編み込みます。(C)1mm間隔の平行なコーティングされていないフック。

図 2.海綿体の解剖 - ランドマーク。(A)陰茎の基部から横方向2mmから下向きに開始する、1cmの垂直皮膚切開。(B)綿の先端の綿棒を使用して分離された陰嚢の外側の筋膜。(C)リトラクター(pm:pyramidalis muscle、it:坐骨結節...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
アドソン鉗子	ファインサイエンスツール	11006から12
デュモン#7鉗子	ファインサイエンスツール	11271-30
デュモン#5鉗子	ファインサイエンスツール	11273から20
タフカットメイヨーシザー	ファインサイエンスツール	14110-15
ミニチュアバンナススプリングシザー	ファインサイエンスツール	15006-09
超微細止血	ファインサイエンスツール	13020-12
Crile Hemostat (クリル止血)	ファインサイエンスツール	13004-14
Kwik-Sil接着剤	世界の精密機器	クウィックシル
テフロンコーティング銀線0.125mm	世界の精密機器	AGT0510
弾性ワイヤーリトラクター	カスタムメイド
メスの刃	ファインサイエンスツール	10023-00
PE-50チューブ	ワーナー・インストゥルメンツ	〒64-0753
23gニードル	クルース	121272
SD-9 矩形パルス刺激装置	ソマトコ	1077/183
血圧トランスデューサーとケーブル	世界の精密機器	BLPR2
Raucotupf コットンチップ アプリケーター	ローマン・ラウチャー	11966
Pro-ophtaオキュラースティック	ローマン・ラウチャー	16515
NaCl 0.9 % 100 mL	地元の薬局
ヘパリン	地元の薬局
25 mLシリンジ	オーデンセ大学病院
獣医用眼軟膏 - Viscotears	地元の薬局
銀線	Science Products GmbH、ハイデルベルク、ドイツ
シリコングルー	Kwik-Sil、World Precision Instruments、サラソタ、フロリダ州、米国

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