出典:Panuccio, G., et al.微小電極アレイに結合したげっ歯類の脳切片におけるてんかん様活動の記録と調節。J. Vis. Exp.(2018年)
このプロトコルは、発作誘発薬にさらされた脳スライスの電気的活動を記録するために微小電極アレイ(MEA)を使用することを含みます。この手順には、脳スライスをMEA記録チャンバーに配置すること、電気刺激を加えて人工発作を誘発すること、および結果として生じる信号を分析することが含まれます。
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方法論記事
微小電極アレイを用いた脳切片における発作誘発性神経電気活動のモニタリング
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。
1. MEAセットアップの準備
>注:録音の15分前に開始してください。
- 残りの容量の4AP-ACSF(4-アミノピリジン人工脳脊髄液)を500mLの三角フラスコに移します。
- 三角フラスコをMEA(Microelectrode Arrays)アンプの上の棚に置き、チューブを使用して溶液が60mLシリンジに連続的に供給されるようにします。三角フラスコとシリンジの高さを調整して、重力供給速度を1 mL/分
にします。 手記：正しい高さは、チューブの内径(ID)によって異なります。内径5/32インチのチューブの場合、30cmで十分です。 - 4AP-ACSFを三角フラスコとシリンジで95%O2/5%CO2ガス混合物でバブリングします。
- 4AP-ACSFを灌流チューブを通ってビーカーに流し、内部に空気が入らなくなるまで流し、溶液の流れを止めます。
- MEAベースの発熱体をサーモスタットに接続します。ドライMEAチップをMEA内に置きます amplifierそして固定します amplif....
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結果
図1:このプロトコルに使用されるカスタム機器。 (A)4APでの回収、予備加温、および予備インキュベーション用の保持チャンバーは、ビーカーとペトリ皿を使用して組み立てられます。ペトリ皿はブレーカーよりも直径が小さく、シリンジプランジャーで所定の位置に保持する必要があります。ペトリ皿の底は、ペトリ皿の縁にシアノアクリレートで接着されたナイロンメッシュ(柔らかいストッキングから)に置き換えられています。酸素は、ペトリ皿の壁とビーカーの間に挿入された曲げられた脊椎針(22G)を介して供給されます。気泡はビーカーの側面から出てくる必要があり、脳のスライスの変位を避けるためにナイロンメッシュに到達しないでください。ペトリ皿の上部は、ACSFの蒸発を防ぎ、酸素飽和度を維持するための蓋として使用できます。(B)カスタム録音チャンバー。で:加熱.......
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| ポリ-D-リジン | シグマアドリッチ | P7886 | MEAコーティングに必要 |
| NaCl | シグマアドリッチ | S9888 | ケミカル |
| KClの | シグマアドリッチ | P9541 | ケミカル |
| KH2PO4 | シグマアドリッチ | 795488 | ケミカル |
| CaCl2*2 H2O | シグマアドリッチ | C3306 | ケミカル |
| D-グルコース | シグマアドリッチ | RDD016 | ケミカル |
| NaHCO3 | シグマアドリッチ | S5761 | ケミカル |
| MgCl2*6 H2O | シグマアドリッチ | M2670 | ケミカル |
| MgSO4*6 H2O | シグマアドリッチ | M5921 | ケミカル |
| 蔗糖 | シグマアドリッチ | RDD023 | ケミカル |
| ピルビン酸、98% | シグマアドリッチ | 107360 | ケミカル |
| 4-アミノピリジン | シグマアドリッチ | A78403の | けいれん薬 |
| STG-2004 | マルチチャンネルシステム | STG4004-1.6mA | 電圧(±8 V)および電流出力(± 1.6 mA)を備えた4チャンネル刺激発生器 |
| MEA1060 | マルチチャンネルシステム | 該当なし | MEAアンプ |
| 平面MEA | マルチチャンネルシステム | 60MEA500/30iR-Ti リング無 | カスタム録音チャンバーを使用するには、リングがない場合があります |
| マックラック | マルチチャンネルシステム | 録音ソフト | |
| マックスティミュラスII | マルチチャンネルシステム | STG4004制御ソフトウェア | |
| TC02 | マルチチャンネルシステム | TC02 | 2チャンネルサーモスタット |
| PH01 | マルチチャンネルシステム | PH01 | 加熱灌流カニューレ |
| 時速 | マルチチャンネルシステム | 時速 | PH01と吸引針用のマグネットホルダー |
| エラストチルE43 | ワッカー | E43 | カスタムレコーディングチャンバーをMEAに取り付けるために使用されるエラストマーシーラント |
| MEAカスタムチャンバー | クリセル楽器 | SKEチャンバーMEA | カスタム録音チャンバー |
| Ag/AgCl電極、ペレット、1.0 mm | クリセル楽器 | 〒64-1309 | カスタムレコーディングチャンバーの参照電極 |
| テルガザイム | シグマアドリッチ | Z273287-1EA | 酵素クリーナー |
| MATLAB | ザ・マスワークス | エレクトロデマッピングのプログラミング環境 | |
| VT1000S | ライカバイオシステムズ | VT1000S | ビブラトーム |
| ワーナー・インストゥルメンツ | 〒64-1309 | Ag-AgCl電極ペレット1.0mm(E205)。参照電極。 |
