ラットの子犬における聴覚脳幹反応の記録

要約

出典:Chang, A. et al., Auditory Brainstem Response and Outer Hair Cell Whole-cell Patch Clamp Recording in Postnatal Rats. J. Vis. Exp. (2018).

このビデオは、ラットの子犬からの聴覚脳幹反応(ABR)を記録する方法を示しています。神経応答を評価するための脳幹での電極配置、音刺激の適用、および信号処理分析の手順を概説します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 聴覚脳幹反応(ABR)記録

1. 麻酔 Sprague Dawley (SD) ラット (生後 1-14 日の子犬と生後 2 か月の成人、男女とも) に 1.5% ペントバルビタールナトリウム (子犬用 22 mg/kg、成人用 30 mg/kg、腹腔内 (i.p.) を 1 回注射します。
2. 麻酔をかけた動物をポリエチレンフォームの型に入れて、動物の体を固定します。動物を防音室の防振テーブルの上に置きます。動物の体温を37.5°Cに保ち、加熱パッドを使用します。
3. 70%(vol / vol)エタノールでヘッド領域を拭きます。細いハサミを使用して、外部耳介に対して1〜2mmの切開を行い、参照電極またはアースを配置します。皮下針電極(記録電極)は頭蓋骨の頂点上にあります(図1A)。
4. 関数発生器を使用して、さまざまな周波数(2、4、8、16、24、32 kHz)と強度(5 dBステップで85 dB SPLから10 dB SPLに減少)のキャリブレーション済みトーンバースト(1 msの立ち上がり/立ち下がり、3 msのプラトー)を生成します。周波数と振幅を手動で、またはコンピューターを使用して変化させます。動物の頭に向かって10cm離れたところにある静電スピーカーから音の刺激を届けます。
5. 多機能プロセッサを使用して、音の誘発電位をフィルタリング(100〜1,000 Hz)、増幅、および平均化(256倍)してABRを取得します。ABRトレースはオンラインで監視され、オフライン分析のために保存されます。1匹の動物からのABR録音を完了するのに約40分かかります.
   手記：通常、レイテンシが 15 ミリ秒未満の 3 つから 7 つのピーク (ウェーブ I からウェーブ VII) を特定できます (図 1B)。ABR閾値は、波IおよびIIを検出できる最小の音レベルとして定義されます。
6. 動物が麻酔から目覚める前に安楽死させます(0.3mLの腹腔内注射、1.5%ペントバルビタールナトリウム)。

結果

図 1.聴覚脳幹反応の記録。(A)記録電極を2つの耳の間の頭皮に挿入しました。接地電極と参照電極は、それぞれ左右の耳介の下に配置されました。オープンフィールドスピーカーをラットの鼻先から10cm離して配置しました。(B)16kHz、80dB SPLトーンバーストに対する2つの代表的なABR波形。P8の子犬から記録された上部のトレース。成体ラットから記録された下のトレース。数字は波形の異なるピークを示しています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ペントバルビタールナトリウム	シグマ	P3761	1.5%の水溶液
SDラット	南医科大学実験動物センター
ES1スピーカー	タッカー・デイビス・テクノロジーズ
TDTシステム3	タッカー・デイビス・テクノロジーズ
SigGenRPソフトウェア	タッカー・デイビス・テクノロジーズ
BioSigRPソフトウェア	タッカー・デイビス・テクノロジーズ
jクランプ	科学的なソリューション
低ノイズデータ収集システム	軸索	1440A