出典:宮城島、K.J.、他マウス網膜色素上皮の光誘発電気応答を記録するための直接結合網膜電図(DC-ERG)。J. Vis. Exp.(2020年)。
このビデオは、暗順応した麻酔をかけたマウス網膜色素上皮(RPE)に直接結合網膜電図(DC-ERG)を記録する方法を示しています。拡張液滴を適用した後、動物を記録装置に入れ、塩緩衝液で満たされた毛細血管電極を角膜上に置く。ベースラインを確立した後、DC-ERG が記録されます。
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方法論記事
マウスにおける網膜色素上皮の直接結合網膜電図記録
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1. マウスと電極の配置
- マウスを換気の良い、遮光性の高い箱に入れて、暗順応させます。
- 動物は、ケタミン(80 mg / kg)とキシラジン(8 mg / kg)の腹腔内注射によって麻酔されました。
- 角膜に麻酔をかけるために 0.5% プロパラカイン HCl を局所的に塗布し、2.5% フェニレフリン HCl と 0.5% トロピカミドを滴下して ?? 孔を拡張します。.
- ハサミでマウスのひげをトリミングして、記録中に不注意によるけいれんがガラスキャピラリー電極を乱さないようにします.
手記：ERGシステム内のDirect-Coupled Electroretinogram(DC-ERG)刺激プロトコルには、ステップ(前方矢印)またはステップ(後方矢印)をクリックして選択できるいくつかの組み込み刺激ルーチンがあります。ソフトウェアのステップ1、4、および5のみを使用して、DC-ERG録音を準備して実行する必要があります。 - ERGシステムでは、ソフトウェアが正しい患者が選択されていることを確認します。緑色の「プロトコル」ボタンをクリックします。[プロトコルの説明] で [DC-ERG] を選択します。次に、[実行]をクリックします。「はい」をクリックして、これが実行されているテストが正しいことを確認します。
- ステップ1/6の「赤色光刺激」と指定し、ドーム内の赤色光を点灯させ、インピーダンスの変化を観察しながらマウスと電極を配置します。
- マウスを加熱された録音テーブルに置き、鉗子を使用して後脚の皮膚を慎重にテント張りします。針電極を片手でしっかりと持ち、後脚に皮下挿入して固定します。
- 参照銀/シバクロリド(Ag/AgCl)電極(材料表)を口の中に配置し、焼結ペレットが後部頬に沿って静止し、歯の後ろに保持されるようにします
手記：金線電極は、インピーダンス特性が異なり、ピークツーピークノイズが増加するため、口の参照電極として使用しないでください。 - 毛細管電極をマウスの目に配置する前に、ガラス毛細管で電極ホルダーを垂直に持ち、人差し指で電極ホルダーをフリックして、導入された可能性のある気泡を取り除きます。シリンジに取り付けられた25Gの針を使用して、先端にハンクス平衡塩溶液(HBSS)を充填し、先端に気泡が閉じ込められていないことを確認します。HBSSで満たされた毛細血管の開いた先端が角膜に穏やかに接触するように電極ホルダースタンドを配置します。
- 気泡が入らないように、潤滑剤のアイジェルディスペンサーを逆さまに持ち、最初の滴を捨てることにより、特別な注意を払ってください。潤滑剤のアイジェルを各目に一滴垂らして、導電性を維持し、記録中の乾燥を防ぎます。
2. DC-ERG録音
- ステップ(前方矢印)をクリックして、ステップ4/6「ロングフラッシュNo-Li」を選択します。
- [インピーダンス]をクリックします。インピーダンスチェック画面を使用して、左右の目の抵抗を調べます。各眼の記録電極のインピーダンス値は、ほぼ同じであると予想されます(~39kΩ)。グランドと基準電極のインピーダンス値は10kΩ未満であると予想されます。
- [プレビュー]をクリックして、左目と右目の痕跡を表示します。安定したベースラインが達成されるまで待ちます (<10 分)。[停止] をクリックしてトレース プレビューを終了します。
手記：ドリフト方向の急激な変化や記録の異常なノイズは、時間の経過とともに改善されず、注意が必要なキャピラリー電極を特定する必要があります。最も可能性の高い原因は、電極の先端に導入された気泡です。先端にHBSSを補充します。もう一度[プレビュー]をクリックして、ベースラインを確認します。 - [ステップ](前進矢印)をクリックして、ステップ5/6「ロングフラッシュ10 cd 7分」を選択します。[実行]をクリックして録音を開始します。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| Ag/AgCl(口)電極 | WPI株式会社 | EP1 | マウス用口参照電極 |
| セラミックタイル | サッターインストゥルメント | CTSの | ガラスキャピラリーチューブを適切なサイズにカットするために使用されます |
| コットンチップクリーニングスティック | ピューリタンメディカルプロダクツ | 867-WC 接着剤なし | 電極ホルダーアセンブリのフィット感を向上させるためのスペーサーとして使用します |
| 網膜電図(ERG)システム | Diagnosys合同会社 | E3システム | 視力研究および薬物試験における眼科状態の診断のための視覚電気生理学システム |
| ブンゼンバーナー | アルゴステクノロジーズ | BW20002460 | または、炎の下でガラスを形作るのと同等です |
| ガラスキャピラリーチューブ(1.5mm) | サッターインストゥルメント | BF150-75 | HBSSを充填し、角膜に接触させるため |
| ハンクの緩衝塩溶液(HBSS) | サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社 | 14175-095 | 市販。RTでメンテナンス |
| インラインフィルター | ワットマン | 〒6722-5001 | 真空ポンプをエアロゾルから保護するため |
| マイクロ電極ホルダー用低ノイズケーブル | WPI株式会社 | 5372 | ケーブルと電極ホルダーアセンブリの長さと配置を改善するために提案 |
| マグネティックボールジョイント | WPI株式会社 | 500871 | 電極ホルダーアセンブリをステージ上に磁気的に位置決めするため |
| マットラボ | 数学 | MatLab:解析ソフトウェアの編集用 | |
| Matlab Curvefit ツールボックス | 数学 | Toolbox for MatLab (解析ソフトウェアの編集にのみ必要) | |
| MatLabコンパイラ | 数学 | Toolbox for MatLab(解析ソフトウェアの編集と再リリースにのみ必要) | |
| MatLab ランタイム バージョン 9.5 | 数学 | R2018b(9.5) | 解析ソフトウェアの実行に必要:https://www.mathworks.com/products/compiler/matlab-runtime.html |
| マイクロ電極ホルダー(45度) | WPI株式会社 | MEH345-15 | キャピラリーを保持するためのもの |
| ニードル(25ガ) | コヴィディエン | 8881250313 | キャピラリーチューブにHBSSを充填するため |
| 針(アース)電極 | リズムリンク | 13mm - 1つのエルクトロード | マウス用皮下針電極(アース)(長さ13mm、針径0.4mm、リード線1.5m) |
| レギュレーター/パワーコンディショナー | ファーマン | P-1800 | または、電力線を介して導入されるノイズからDCオフセットを除去するのと同等です |
| シリンジ(12mL) | モノジェクト | 1181200777 | キャピラリーチューブにHBSSを充填するため |
| Tクリップ | コール・パーマー | 06852から20 | 電極ホルダーの組み立て用 |
| 真空デシケーター | ベルアート | 420120000 | 透明なポリカーボネート製ボトム&カバー |
| 薬理学的治療 | |||
| 潤滑剤アイジェル | アルコン | 0078-0429-47 | 角膜表面を潤滑し、毛細血管電極との電気的接触を維持するのに役立ちます |
| フェニレフリン塩酸塩 2.5% | アコーン | 17478-201-15 | 短時間作用型散瞳点眼薬(瞳孔散大用) |
| プロパラカイン塩酸塩0.5% | アコーン | 17478-263-12 | 点眼のための局所麻酔薬 |
| トロピカミド0.5% | アコーン | 17478-101-12 | 短時間作用型散瞳点眼薬(瞳孔散大用) |
| キシラジン | アナセド | sc-362949Rxの | 鎮痛薬と筋弛緩薬 |
| ゼタミン(ケタミンHCl) | ベトワン | 501072 | 筋肉内注射用麻酔薬 |
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