マウス脳ウェッジスライスにおける聴神経根刺激とシナプス後電流記録

Abstract

出典: Fischl, M. J., et al. In Vitro Wedge Slice Preparation for Mimicking In Vivo Neuronal Circuit Connectivity. J. Vis. Exp.(2020年)

このビデオは、マウス脳のくさびスライスの内側の乏蝸牛ニューロンの聴覚神経根を刺激し、シナプス後電流を記録するためのプロトコルを示しています。

Protocol

動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

1. 電気生理学のセットアップと記録

1. ウェッジスライスを録音チャンバーに置き、ハープまたはスタビライジングシステムでスライスを固定します。カルボゲンで泡立たせた温かい(35°C)ACSFを使用して、7〜10 mL /分の速度で組織を連続的に灌流します。
2. 561 nm発光フィルターによる落射蛍光法を使用して、台形体VNTBの腹側核における遺伝的に標識された内側オリボコクレアMOCニューロンを同定し、パッチクランプ記録を行います。パッチ適用可能なセルがない場合は、スライスを反転します。
3. DIC光学系を使用して、スライスの厚い側の聴神経根に焦点を合わせ、マイクロマニピュレータを使用してバイポーラタングステン刺激電極を聴神経根まで下ろし、組織の表面に穏やかに移動します。
   手記：吸引電極は、他の研究室の聴覚神経刺激実験で使用されてきました。シータガラス電極または光刺激法は、他の特定の調製物に適用可能な場合、採用することができる。
4. 視野をVNTBに戻して、パッチクランプ電気生理学のターゲットとなるMOCニューロンを選択します。
5. 記録ピペットに、提案された実験に適した内部溶液を入れます。
6. 全細....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
A1R 正立共焦点顕微鏡	ニコンインスツルメンツ		電気生理学およびイメージング顕微鏡は、電気生理学と互換性のある任意の顕微鏡にすることができます
電極ホウケイ酸ガラス、フィラメント外径1.5mm、内径1.1mm、長さ10cm	サッターインストゥルメント	BF150-110から10	パッチクランプピペットガラス
電極充填機 MicroFil	WPIの	CMF20Gの	パッチ電極ピペットフィラー
インラインソリューションヒーター	ワーナー・インストゥルメンツ (GSAdvantage)	SH-27B型	スライス灌流システムヒーター
マルチマイクロマニピュレーターシステム	サッターインストゥルメント	MPC-200 と MP285	パッチクランプおよび刺激電極配置用のマイクロマニピュレーター
P-1000 ガラスマイクロピペット用横型ピペットプーラー	サッター機器	FG-P1000	パッチクランプピペッタープーラー
パッチクランプアンプとソフトウェア	ヘカ	EPC-10 / パッチマスター ネクスト	任意のアンプ/ソフトウェアにすることができます
録音チャンバー	ワーナー・インストゥルメンツ	RC26Gの	録音中に「お風呂」をスライスする
レコーディングチャンバーハープ	ワーナー・インストゥルメンツ	640253	電気生理学記録中にスライスを安定させます
Sliceインキュベーションチャンバー	カスタムビルド		スライス後の回収時にスライスするための加熱された酸素化された保持チャンバー
刺激アイソレーションユニット	A.M.P.I.	アイソフレックス	電気生理学のための刺激遮断ユニット
シリンジ 60CC	フィッシャーサイエンティフィック(Intramalls)	14-820-11	電気生理学灌流液の取り扱い
温度コントローラー	ワーナー・インストゥルメンツ (GSAdvantage)	TC-324Cの	スライス灌流システム温度コントローラー
チューブ 1/8 OD 1/16 ID	フィッシャーサイエンティフィック(Intramalls)	14*171*129	電気生理学灌流液の取り扱い
Tugsten同心円バイポーラ微小電極	WPIの	TM33CCINS	電気生理学のための刺激電極