急性脳切片におけるニューロン接続のペアパッチクランプ記録

この記事について

要約

このビデオでは、脳スライスを固定し、ピペットを配置して全細胞構成を実現し、シナプス前ニューロンを刺激してシナプス後応答を記録することで、ニューロンの接続性を解明する手順を示しています。

プロトコル

動物サンプルを含むすべての手順は、適切な動物倫理審査委員会によって審査され、承認されています。

1. ペアパッチクランプ記録とバイオサイトン充填

シナプス結合のタイプに応じて、シナプス結合ニューロンを見つけるために3つの異なるアプローチが使用されます。接続確率が低い場合 (ほとんどの興奮性接続で予想されるように)、次の手順に従ってください。

接続性が低いニューロン接続
1. パッチピペットに、表1に記載されている組成の内部溶液を入れます。全細胞構成のすべての記録について、3〜5 mg/mlの濃度のバイオシチンを内部(ピペット)溶液に添加して、シナプス前およびシナプス後ニューロンの良好な染色結果を得ます。ビオシチンを細胞内に少なくとも15〜30分間拡散させます（ニューロンのサイズによって異なります）
  注:下記の「検索」ピペットで使用される溶液にバイオシチンを追加しないでください。
2. 全細胞モードで推定されるシナプス後ニューロンにパッチを当てます。長くて細いシャンクのパッチピペットを使用してください。これにより、対物レンズの下でのピペットの操作性が向上し、電極がスライスに導入された....

アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号	コメント
増幅器	ヘカ	EPC 10 USBトリプル	2-3プリアンプ付き
顕微鏡	オリンポス	BX51WI	2つのカメラポートと4×対物レンズ、40×水浸対物レンズ
カメラ	TILL Photonics(ティルフォトニクス)	VX55	赤外線CCDカメラ
ワークステーション	ルイグス&ノイマン	赤外線240	電動XYステージと顕微鏡用の電動フォーカス軸付き
マイクロマニピュレーター	ルイグス&ノイマン	SM-5	X-Y-Zマニピュレーター(2-3プリアンプ用)
ファラデーケージ	ルイグス&ノイマン
防振テーブル	ニューポートスペクトル物理学
パッチマスター	ヘカ
ミクロトーム	マイクロムインターナショナル	HM650Vの
マイクロピペットプーラー	ヘカ	サッターP-97
ニューロルシダシステム	微小明視野		NeurolucidaおよびNeuroexplorerソフトウェアを使用

シリーズ

この記事について