リゾレシチンを用いた視神経の局所脱髄誘導

要約

出典: You, Y. et al., Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination. J. Vis. Exp. (2015)

このビデオは、麻酔をかけた動物の視神経に外科的にアクセスし、リゾレシチンを正確に送達して限局性脱髄を誘発し、さらなる研究のための神経病理学的条件を作り出す手順を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 視神経注射

1. ケタミン(75 mg / kg)とメデトミジン(0.5 mg / kg)の腹腔内注射で動物に麻酔をかけます.
   手記：麻酔導入後、離脱反射(ピンチテスト、角膜および眼瞼反射など)とそれらがないことを観察し、手術を開始するための指標として観察します。手術中、動物を継続的に監視し、反射がある場合は追加の麻酔薬(補充ごとに初期ケタミン用量の10%)を投与します。実験には成体ラット(>12週)を使用します。
2. 手術部位の皮膚を剃ります。手術中に体温を維持するために、動物を加温パッド(37°C)に置きます。ポビドンヨードの局所塗布を通じて肌を準備します。外科用ドレープを適用します。全身麻酔下での角膜の乾燥を防ぐために、局所眼科用軟膏を塗布します。.無菌器具を使用して無菌を維持します。
3. ランダムに選択した目の眼窩の上の皮膚に1〜1.5cmの切開を行います。皮下組織を開き、細い虹彩ハサミを使用して眼窩腔に到達します。手術用顕微鏡で結膜と前ほぞ嚢を開きます。
4. 外眼筋と眼窩内涙腺を引っ込めて、視神経の長さ約3mmを露出させます。視神経の周りの硬膜層とくも膜状物質層を眼科用ブレードを使用して縦方向に開きます。
5. ガラスピペットを球体から後方2mmの距離で視神経に挿入します。ガラス製マイクロピペットはハミルトンのシリンジに取り付けられています。
6. 1% リゾレシチン (0.4 - 1.0 μl、髄鞘形成に影響を与えない 0.02% Evan's Blue を含む) を約 30 秒かけてゆっくりと神経に注入します。
7. 皮膚の切開部を縫合します。感染を防ぐために抗生物質軟膏を塗布します。仲間の目は、電気生理学記録の内部制御として役立つことができます。
8. 麻酔から回復するために、動物を保温パッドの上に置きます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ケタミン100mg / ml(ケタミル)	トロイ研究所	AC116
メデトミジン1mg / ml(ドミトール)	ファイザー	SC-204073
ホモエオサーミックブランケットシステム	ハーバード大学装置	NC9203819
ハミルトンシリンジ	ハミルトン	87930
リゾレシチン	シグマ	L4129
エバンズブルー	シグマ	E2129