ラットモデルにおける顔面神経損傷の誘発

要約

出典:Ali, S. A., et al.軸索の抑制と再生を研究するためのラットモデルでの顔面神経手術。J. Vis. Exp.(2020年)

このビデオでは、ラットモデルでの手術プロトコルを示し、麻酔の準備から顔面神経損傷の誘導までの手順を詳しく説明しています。このプロトコルは、医学研究における神経再生や外科的技術の研究に役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 麻酔と準備

1. 動物を麻酔室に置き、1.8%イソフルランと0.9L / min酸素を介して全身麻酔を誘発します。
   1. 自発呼吸の評価と、つま先のつま先つまみに対する動物のしかめっ面の反応を評価することによる意識の評価を通じて、適切な麻酔面を確認します。
2. 角膜の炎症や乾燥を防ぐために、アイローションを両側に塗布します。
3. かみそりまたは自動クリッパーで手術部位を剃ります。
   1. この時点で、耳タグまたは尾のラベル/マーキングのいずれかを使用して、ラットを識別する方法を確立します。
4. 術後の痛みに対する予防のために、動物の背中に沿って0.05 mg / kgブプレノルフィンの皮下注射を投与します。.

2. 外科的アプローチと傷害パターン

1. 動物を手術台に移し、ノーズコーンを介してガスの流れを続けます。体温を維持するために、加温パッドが動物と無菌フィールドの下に配置されていることを確認してください。
2. 滅菌したガーゼ(丸めてテープで固定)をラットの首に置き、ネックロールとして使用すると、手術野の露出が増加します。動物の適切な位置は、効率的な神経の識別と解剖にとって最も重要であることに注意してください。
3. 手順のために動物の顔の皮膚を準備します。消毒を確実にするために、手術部位をクロルヘキシジンまたはヨウ素ベースの溶液と70%エタノールと交互に3回こすります。
4. 必要に応じて、外科的切開を計画し、マーキングします。同側の耳を前後方向に操作して、耳介後皮膚の自然な折り畳みを決定します。
5. 鋭い虹彩はさみまたは15番の刃を使用して、耳介後折り目を4〜5mm切開します。これは、必要に応じて手順の後半で拡張できます。
6. 即時の皮下筋膜を鈍く解剖し、マイクロワイトラナーリトラクターを配置して曝露を強化します。.この領域には小口径の血管がある可能性があることに注意してください。これらは、Weitlanerリトラクターを介して上下に引っ込めることによって最もよく回避されます。
7. 前顎筋が頭蓋底に沿って挿入に向かって劣った方向から上方向に移動するときに、前顎筋を特定します。
   1. 挿入点に沿って筋肉腹をそっと広げて、前腹部腹の腱を明らかにします。腱は、頭蓋骨の基部にしっかりと挿入された筋肉から発せられるフィルム状の白いプロセスとして表示されることに注意してください。
8. 前顎筋とその腱を特定したら、Weitlanerリトラクターを調整して、筋肉の腹をさらに引っ込めます。その後に露出した領域は、顔面神経の主幹がある3次元空間であることに注意してください.
   手記：この領域は、頭蓋底によって上および内側に、前顎筋によって横方向に、後内側に外耳道によって、そして下方には表在性側頭動脈を含む首の構造によって境界付けられています。
9. 適切な曝露後、顔面神経の主幹が二腹部筋の腱の下から下に移動し、頭蓋底から茎状筋孔を出るときに、顔面神経の主幹を特定します。神経は、動物の耳下腺-咬筋膜に包まれた真珠のような白いコードとして現れることに注意してください。次の理由で神経をさらに露出させるときは注意してください。
   1. ストレッチ媒介性神経運動障害を防ぐために、積極的な解剖や垂直な広がりを避けてください。
   2. 外耳道を覆う薄い組織を侵害するのを防ぐために、後方および内側に向けられた積極的な解剖は避けてください。
   3. 広範囲の内側および下向きの解剖を通じて表在性側頭動脈を損傷することを避けてください。.怪我は活発な拍動性出血によって識別されることに注意してください。
      1. 動脈が損傷している場合は、綿の先端のアプリケーターまたは鉗子を介して滅菌ガーゼで迅速に圧力をかけます。.止血剤または液体フィブリンシーラントは、近くに置くことができます。動物は体液を安定させるために0.9%滅菌生理食塩水の皮下注射を必要とする場合があることに注意してください。
10. 神経に沿って下方向に解剖することにより、茎状突孔の出口から遠位に、主幹を遠位にトレースします。
    1. 元の切開部を伸ばして、神経とその枝を完全に露出させます。耳下腺を混乱させることは、術後の唾液分泌瘤を引き起こす可能性があるため、避けてください。
11. 次のように、目的の傷害パターンを誘発します。
    1. 挫傷の場合は、表面が滑らかな宝石商の鉗子を使用して神経をしっかりとつかみ、圧迫します9。神経に一定で再現性のある圧力を30秒間加えて、適切な挫傷を確実にします。
    2. 単純な切断の場合は、神経を覆う筋膜、またはすぐに神経上膜を細い歯の鉗子でつかみ、鋭利なマイクロハサミを使用して、1回のカットで目的のポイントで神経をきれいに横断します。鉗子で神経に過度の牽引がかからないように注意してください。
    3. 神経ギャップモデルの場合、単純な切断損傷と同様の方法を使用して、目的の神経ギャップを作成します。動物間の損傷パターンの類似性を確保するために、術中に目的の神経ギャップの長さにカットされた綿先端のアプリケーターの滅菌シャフトを使用します。

3. 創傷閉鎖

1. 滅菌生理食塩水で傷口を洗浄し、滅菌ガーゼで乾燥させます。
2. 吸収性縫合糸を使用して、単純な皮下法で皮膚の縁を近似するか、創傷閉鎖にも許容される皮膚接着剤または創傷クリップを使用します。片方の皮膚の端を深くから表面的に噛み、次に反対側の皮膚の端を表面から深く噛むことにより、埋設ステッチを配置します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1.8%イソフルラン	ベトワン	13985-030-40
11-0ナイロンマイクロ縫合糸	AROSuture	TK-117038
4-0 モノクリル縫合糸	VWRの	75982-084
ブプレノルフィンSR	ズーファーム	ミフ 900-006
カルプロフェン	シグマ・アルドリッチ	MFCD00079028
クロルヘキシジン	VWRの	IC19135805
ジュエラー鉗子	VWRの	21909-458
マイクロワイトラナーリトラクター	VWRの	82030から146
マイクロハサミ	VWRの	100492-348
ミニ腱切開はさみ	VWRの	89023-522
15番メスの刃	VWRの	102097-834
手術用顕微鏡	ライカ
ワセリンアイジェル	ファーマダーム	B002LUWBEK
滅菌水	VWRの	89125-834
ティッシュ接着剤	ベトボンド、3M	NC9259532
水導体パッド	アクアリリーフシステム	ARS2000B