ラットモデルにおける活動性HIV感染の確立

要約

出典:Li, H., McLaurin, et al. A Rat Model of EcoHIV Brain Infection. J. Vis. Exp. (2021年)。

このビデオは、ラットの脳の皮質にキメラHIVウイルスを注入する手順を示しています。そこでは、ウイルスRNAが宿主ゲノムに統合され、複製され、拡散して実験モデルで活動性HIV感染が確立されます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV Enhanced Green Fluorescent Protein] ウイルス定位手術

1. 3%セボフルランを使用してラットに麻酔をかけます。ラットが有害な刺激に反応せず、反射神経が欠如している場合は、ステップ1.2に進みます。
2. 脳領域の毛を剃り、70%エタノールとクロルヘキシジンベースのスクラブで皮膚を2回滅菌します。ラットを腹臥位で定位固定装置に固定します。
3. 頭皮の正中線に沿って皮膚を切開(5〜6 cm)します。
4. 横方向0.8 mm、吻側1.2 mmからブレグマまでの2つの穴あけ位置に印を付けます。各頭蓋骨の位置に穴(直径0.4 mm)を開けます。
5. 滴定したEcoHIVレンチウイルス溶液(1.04 × 10⁶ TU/mL)を10 μL注射器に充填します。シリンジを定位固定装置に固定します。
6. ドリル穴の表面近くで針を下に移動します。深さ2.5mmを測定して移動します。
7. 1 μLのウイルス溶液を0.2 μL/分の速度で注入します。針を注射領域内に5分間保持します。針をラットの頭蓋骨の外側までゆっくりと上に動かします。
8. 4-0の絹糸で皮膚を縫合します。
9. 切開部を70%エタノールで一度滅菌します。ブトルファノール(ドロレックス、0.1 mg / kg体重)を皮下注射します。.
10. ラットが目覚めるまで、加熱パッド付きの回復チャンバーに移します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
抗生物質-抗真菌剤溶液	セルグロ	30004CIの	100倍
カバーガラス	VWRの	637-137
ドリル
Ethicon Vicryl Plus 抗菌、4-0 ポリグラクチン 910 縫合糸、27in.FS-2	メッド獣医インターナショナル	VCP422H
ハミルトンシリンジ	ハミルトン	1701
アイリス鉗子	世界の精密機器	15914
アイリスハサミ	世界の精密機器	500216
脳定位固定装置	コップフ・インスツルメンツ	モデル900
バンナスシザース	世界の精密機器	500086

の 年