電気刺激を用いたラットモデルにおける急性ポンス梗塞の誘導

Abstract

出典:Luo, M., et al.電気刺激によるラットにおける急性橋梗塞の確立。J. Vis. Exp.(2020年)

このビデオは、電気刺激を使用して麻酔をかけたラットの橋に組織損傷または梗塞を誘発する手順を示しています。

Protocol

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 橋梗塞の確立

1. 麻酔の直前に加熱パッドを予熱します。
2. スカルドリルを脳定位固定装置フレームのホルダーに取り付けます。
3. ラットに50 mg / kgケタミンと5 mg / kgキシラジンを腹腔内注射します。.つま先をつまむ反応がないか確認してください。
4. ラットを腹臥位で定位固定装置フレームに取り付けます。イヤーバーを外耳道の上に配置して、頭を固定します。注射のゆがみを避けるために、頭蓋骨が水平に保たれていることを確認してください。
5. イソフルラン(酸素100%、イソフルラン2.5%)により、入口ポートと出口ポートを持つラット用の定位固定用ノーズコーンアタッチメントを介して麻酔を維持します。加熱パッドを使用して温度を37°Cに維持し、手順全体を通して監視します。
6. 角膜の乾燥を防ぐために目の軟膏を使用してください。鉗子を使用して前足をつまんで、痛みがわずかに反応しないようにします。
7. マイクロシェーバーで頭蓋骨の毛を剃ります。クロルヘキシジン外科用スクラブを外科的切開部位から外側に回転させて円形に塗布します。
8. 両側の外側眼砦の線から後頭蓋の0.5cm後ろまでメスで3cmの正中線切開を行います。
9. 綿棒を使用して血液を取り除きます。
10. 頭皮を露出させるために、皮膚フラップの両側にサージカルテープを貼る必要があります(図1)。
11. 0.9%NaClに浸した綿棒で頭蓋骨から結合組織を静かに取り除きます。取り除かないと、結合組織がドリルに引っ掛かってしまいます。
12. ブレグマを特定します。ブレグマの中心点を原点として選択し、細い黒いサージカルマーカーペンを使用してマークします。
13. ドリルを6.0 mm AP、2.0 mm MLに配置します(0.5〜3.0 mmの範囲、図2A)。
14. 自動ドリルを使用して開頭術(直径1mm)を行います。このポイントは静脈洞に近いため、慎重に進めてください。
15. 脳定位固定装置フレームからドリルを取り外します。
16. 絶縁シース付きの22Gプローブを脳定位固定装置フレームに配置します(図3A)。プローブの先端は、シースの近位端から2mm上に配置する必要があります(図3A、B;図 2B)。
17. シースが脳に7mm入ることを確認します(7 mm DV、図2B;図1C)。
18. プローブの先端が脳の表面から9 mm下になるまで、プローブをシースに沿って進めます(図1D)(図2D)。
19. 電極を電気刺激装置に接続します(図3C)。図1Dに示すように、アノードをプローブに接続します。カソードをラット(通常はラットの耳)に接続します。
20. 電気刺激装置をオンにし、パラメータを 1 パルス幅 = 4,050 ms、電圧 = 50 V、電流 = 4 mA に設定します (図 3C)。電気刺激中、ラットは震えを示します。この研究では、行動試験、MRI、およびTTCに使用した対照群ラットに対して、デバイスの電源がオンになっていませんでした。
21. 刺激後5分間、プローブを所定の位置に置いておきます。
22. プローブを脳から取り外します(図1F)。
23. 開頭術を覆うために骨セメントを使用します。創傷縫合の前にセメントを乾かしてください。
24. 4-0ポリアミド縫合糸フィラメントで創傷を縫合します。3〜4針縫った後、2-1-1の標準的な外科用結び目を結びます。
25. 感染を防ぐために、ラットにペニシリン(0.25 mL、80 IUを4 mLの生理食塩水で希釈)を腹腔内に注射します。.
26. ラットにメロキシカムを2 mg / kgの用量で皮下注射し、その後24時間ごとに繰り返します。.
27. 完全に目覚めるまで15分ごとにラットを監視し、加熱パッドでケージに戻します。生け贄まで食料と水への無料アクセスを提供.
    手記： すべての手順は、無菌手術の原則に従う必要があります。手術前に、手の手術後、スクラブトップ、サージカルマスク、滅菌手袋を着用します。滅菌フィールド内で常に滅菌縫合材料を維持してください。

Results

図1:梗塞の確立。(A)頭蓋骨に開けられた穴。(B)シースを穴に移動します。(C)シースの注入。(D)プローブの注入。(E)アノード(赤い矢印)が接続されています。(F)プローブを取り外します。(G)脳表面に残された穴(赤い矢印)。

図2:プローブの位置。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
4-0 サクチャー	上海金中		手術器具
粘着テープ	上海金中		手術器具
動物麻酔システム	RWDの		システム使用時のマスク着用
骨セメント	上海金中		手術器具
硬化クランプ	上海金中		手術器具
一般的なティッシュペーパーはさみ	上海金中		手術器具
インドフォール	中国の国耀		殺菌
イソフルラン	RWDの	217181101
病変形成装置	上海玉燕		病変を作る
MRIシステム	ブルカーバイオスピン		in vivoでの梗塞の確認
ニードルホルダー	上海金中		手術器具
ペニシリン	中国の国耀		感染予防
プローブ	アンケ		いくつかの変更が必要です
Qヒント	上海金中		手術器具
せん断はさみ	上海金中		手術器具
脳定位固定装置	RWDの
縫合針	上海金中		手術器具
組織保持鉗子	上海金中		手術器具
TTCの	シグマ・アルドリッチ	BCBW5177	in vitroでの梗塞確認に