ラットモデルにおけるレーザー誘発脳損傷の実施

要約

出典:Kuts, R., et al. Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats. J. Vis. Exp. (2020)

このビデオは、レーザーを使用してラットの運動皮質に正確で制御された脳損傷を生成する手順を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. レーザーによる脳損傷の実験手順

1. 酸素中の2%イソフルランの混合物でラットを麻酔し、自発換気を可能にします。.鉗子で尾をつまんで、離脱反射がないかどうかを確認することにより、十分な麻酔薬の深さを確認します。
2. 直腸体温調節された加熱パッドを使用して、実験手順全体を通してラットの深部体温を37°Cに保ちます。
3. シェーバーで局所的な毛を取り除き、70%アルコールと0.5%グルコン酸クロルヘキシジンで消毒します。消毒手順をさらに2回繰り返します
   注:外科的切開部の幅は約3cmである必要があります。切開部の周りの少なくとも2cmの髪を取り除きます。
4. ラットを腹臥位の定位固定装置ヘッドホルダーに置きます。頭皮を横方向に反射させ、ブレグマとラムダの間の領域を露出させるために3cmの切開を行います。
5. ノーズコーンを通して麻酔を維持します。
6. ネオジム-YAG(Nd-YAG)レーザー(ピーク波長1064nm)を使用して、右半球の上の頭蓋骨の露出領域に50J X 10ポイントを1秒のパルス持続時間で投与します。
7. 装置のレーザー発生部分が露出領域から2mm離れていることを確認して、レーザービームを生成します。50J X 10ポイントは、さまざまなエネルギー/表面の組み合わせを慎重に評価した後に選択されました。この組み合わせは効率的で、投与後に頭蓋骨の骨破壊を1秒未満引き起こしません.
   注:2 mmは、レーザービームの端子(通過する光ケーブルから)と頭蓋骨との間の距離です。集光レンズを使用する場合は、レンズの傾斜角を考慮して距離を計算し、ビームを所望の損傷領域に集束させる必要があります。レーザーデバイスを使用するときは、適切なトレーニングや目の保護など、適切な安全性を確保してください。
8. ラットを装置から取り外し、3-0シルク外科用縫合糸で頭皮を閉じます。
9. 麻酔を中止し、ラットをケージに戻して回復させます。0.1mLの0.25%ブピバカインを局所投与して、手術直後の術後の痛みを軽減します.
   手記：正しく実行すれば、全体の手順は5分未満で完了します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
脳および組織マトリックス	シグマ - ALDRICH	15013
デジタル体重計	シグマ - ALDRICH	RS 4000
エタノール 96 %	ロミカル		引火性液体
温度計付きヒーター	ヒーティングパッド-1	モデル:HEATINGPAD-1 / 2
インフュージョンカフ	ABNの	アイシファイ500
イソフルラン、USP 100%	ピラママル・クリティカル・ケア・インク	NDCの66794-017
メスの刃 11	シグマ - ALDRICH	S2771
Sharplan 3000 Nd:YAG(ネオジムドープイットリウムアルミニウムガーネット)レーザー加工機	レーザーインダストリーズ株式会社
脳定位固定装置用ヘッドホルダー	コップフ	900LS

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