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動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1. レシニフェラトキシン(RTX)ニューロパチーの確立
>注意:RTXは神経毒性があり、危険です。接触すると、目、粘膜、上気道を刺激する作用があります。RTXの準備中は、吸入を避け、ラボ用眼鏡やコートを着用してください。皮膚に付着した場合や取り扱い後は、多量の水で洗い流してください。
- 等量のTween 80と無水エタノール(溶媒ごとに100 μL)を混合した200 μLの混合物に、1 mgのRTX粉末を加えます。
- RTX溶液(12 μL/バイアル)を分注し、-20°Cで最大3ヶ月間保存します。これがRTXストックを構成します。有効期限が切れたら、残りの RTX ソリューションを破棄します。
- RTXストックを生理食塩水で最終容量600μLに希釈します。RTX溶液の最終濃度は0.01%で、これは10μLの車両溶液中の1μgのRTXに相当します。
- 8週齢の成人雄ICRマウス(35-40g)を実験動物として用い、マウスにマイクロインジェクション注射器を用いてRTX溶液(用量:それぞれ200、50、10μg/kg)を腹腔内(i.p.)で単回投与します。マウスは、深部麻酔のために5%イソフルランを含む吸入器で麻酔しました。RTX注射中にマウスが四肢の離脱作用を示した場合、マウスはより長い麻酔吸入を受けるべきである。
例:マウスの体重が40gの場合、マウスは20μLのRTX溶液を受け取り、これは50μg/kgの用量に相当します。
- マウスの1つのグループに、コントロールとして等量のビヒクル(生理食塩水中の10%Tween 80および10%無水エタノール)を与えます。
- RTX注入後、マウスを12時間のライト/12時間のダークサイクルでプラスチックケージに戻し、餌と水を自由に供給します。