ショウジョウバエに閉鎖性外傷性脳損傷を負わせる技術

要約

出典:Sun, M., et al. A novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

このビデオは、麻酔をかけたショウジョウバエに、ガス推進式インパクターを備えたストライクデバイスを使用して、閉頭部外傷を負わせる手順を示しています。この損傷は神経機能に影響を及ぼし、歩行能力を損

ないます。

プロトコル

1. ストライクデバイスの組み立て(図1)

1. 1mLのツベルクリン注射器からプランジャーを取り外します。.バレルを1mLのマークでカットします。
2. 200 μLのピペットチップからエアロゾルバリア(高さ3 mm x 直径4 mm)を取り外し、インパクターとして使用します。インパクターをシリンジバレルの中に置きます。バレルを軽くたたいて、インパクターを先端に移動し、平らな面がノズルの開口部を覆います。
3. バレルの先端を、ショウジョウバエ麻酔ステーションの二酸化炭素(CO₂)フローレギュレーターに接続されているプラスチックチューブに取り付けます。
4. バレルを垂直に保持し、標準のクランプホルダースタンドにcl インパクターがバレルの下部に留まるようにします。
5. 200 μLのピペットチップを改造してフライホルダーにします。
   1. 先端から4mmを切り取って直径0.8mmの開口部を作り、フライヘッドだけを露出させます><。 注意: 胸部とフライボディの他のすべての部分は、ピペットチップの内側に留まります。
6. 1,000 μLのピペットチップと1 mLのシリンジニードルキャップを改造してコネクターを作ります。
   1. 先端の開口部から44mmを切り取ります。長さ 6 mm の 1 mL シリンジ ニードルキャップを 1,000 μL ピペットチップの残りの部分にしっかりと押し込みます。

2. ストライクデバイスの操作

1. フライパッドで_CO2を使用して、生後2日の成虫の雌のハエ1匹に麻酔をかけます。
2. 細いブラシを使ってフライホルダーにそっと移します。ホルダーを軽くたたいて、フライヘッドが先端の外側に見えるようにします。ハエの吻が先端の外側に露出している場合は、鈍い1mLの注射針で先端の内側にそっと押し込みます
   手記：ハエのテングをホルダーの内側に置いてください。さもなければ、ハエは吸う吻の傷害で死ぬかもしれません。
3. フライヘッドが下を向くように、フライホルダーをコネクタでシリンジバレルに締めます。
4. ガス圧を100kPaに設定します。実験計画に応じて流量を調整してください。
5. フローレギュレーターのトグルスイッチをすばやくオン/オフして、インパクターがフライヘッドに一度当たるようにします。
6. フライホルダーを持ち上げて、フライパッドの上に移動します。フライホルダーを裏返し、側面を軽くたたいてフライを外に出す。フライを空のバイアルに入れて回復させます。

結果

図 1.ストライクデバイスの図。この装置は、ショウジョウバエの研究室ですぐに入手できる材料を使用しました:1)200μLピペットチップ、2)1mLツベルクリンシリンジ、3)インパクター、4)ショウジョウバエ麻酔ステーションに引っ掛けられた接続チューブ、5)チップをシリンジに締め付けるためのコネクタ。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
エアロゾルバリア	USAサイエンティフィック	〒1120-8810	インパクターとして使用
200 ulピペットチップ	USAサイエンティフィック	〒1111-0706	フライヘッドホルダーとして使用
1000 ulピペットチップ	USAサイエンティフィック	1122-1830	コネクタとして使用
1 mlツベルクリンシリンジ	ベクトン・ディキンソン	309625
60mmシャーレ	フィッシャーサイエンティフィック	FB0875713A	トラッキングアリーナとして使用
フローレギュレーター	ジェネシー・サイエンティフィック	59-122WC
標準クランプホルダー/スタンド	アイスコ・サイエンティフィック	CH0688
ファインブラシ	ジェネシー・サイエンティフィック	59〜204
フライパッド	ジェネシー・サイエンティフィック	59〜114

年