新生児低酸素性虚血性脳損傷のマウスモデルの確立

要約

出典:Kim, M., et al. Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury. J. Vis. Exp. (2017).

このビデオは、新生児の低酸素虚血性脳損傷を研究するためのマウスモデルを作成する手順を示しています。これは、虚血を外科的に誘発し、動物を低酸素症にさらして脳の損傷を悪化させるための手順を概説しています。最後に、結果として生じる脳病変を評価し、マウスモデルがさらなる科学的研究のために準備されていることを確認する方法を示します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 新生児HI脳損傷のマウスモデル

1. イソフルランで子犬を麻酔します。
   1. 子犬(5匹未満)を麻酔ボックスに入れ、蓋を閉めます。
   2. 麻酔システムの電源を入れ、卓上麻酔器を使用してガスとイソフルランを調整します。酸素流量計を1.5 L / minに調整します。麻酔の導入のためにイソフルラン気化器を3〜5%に調整します。
   3. 15分後、麻酔を維持するためにイソフルラン気化器を1〜2%に調整します。
2. 完全に麻酔をかけた子犬を解剖顕微鏡の下(腹部を研究者に向ける)に置き、テープで固定します。
3. 滅菌したハサミを使用して、首に~0.7mmの切開を行います。
4. 滅菌した鉗子を使用して脂肪組織を慎重に除去し、片側の右頸動脈を露出させます。
5. 片側右頸動脈を5-0吸収性縫合糸で結紮します。
6. 首の切開部を5-0縫合糸で縫合します。
7. 各子犬を37°Cの温かい低酸素チャンバーに1時間置き、回復させます。チャンバーの蓋を閉めないでください。
8. 手術の1時間後、子犬が完全に目覚めたら、低酸素チャンバーの蓋を閉じ、ガスレベルを下げて低酸素状態(8%_O2および92%_N2)を確立します。
9. 90分間の低酸素状態の後、子犬をケージに戻します。
10. HI脳損傷の1週間後、手順1を繰り返します。
    1. 麻酔後、滅菌したハサミと鉗子で頭皮を切開し、右半球の後外側領域の脳病変を特定します
       手記： この治療法は、子犬に低酸素症を誘発します。すべてのマウスにおける脳損傷の存在と程度は、半透明の頭蓋骨を通して肉眼で視覚的に評価されます。変色(すなわち、脳病変)のサイズまたは量によって決定されるように、子犬はグループに分類されます。目に見える皮質損傷がない場合、マウスは「皮質損傷なし」グループに分類されます。目に見える皮質損傷(すなわち、右半球の病変)がある場合、マウスは「皮質損傷」グループに分類されます。マウスのグループへの分類は手術の1週間後に行われるため、犠牲時に脳サンプルの形態が明確に定義されている場合、グループを変更することができます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
低酸素チャンバー	Jeung Do Bio & Plant Co.(ジュンドバイオ&プラント)	エクスペリメンタルビルダー
ハーバード装置フルオバック麻酔システム	ハーバード大学装置
麻酔ボックス			アクリルボックス
I-フランリキッド(イソフルオラン)	ハナファーマ株式会社		一般麻酔薬(イソフルラン100ml)
CD-1マウス	(株)オリエント
ブルーナイロンモノ非吸収性縫合糸5-0 50cm	株式会社アイリー	NB521