中枢神経系感染症を発症したマウスモデルの生成

要約

出典:Shen, T., et al. デングウイルス誘発性急性ウイルス性脳炎様疾患のマウスモデル。

このビデオでは、CNS感染したマウスモデルの生成を実演しています。授乳中の子犬に、頭蓋内および腹腔内の両方でウイルスを注射します。ウイルスは広がり、CNSに感染し、ニューロン細胞の死と炎症を引き起こします。子犬は、病気が進行するにつれて感染の症状について評価されます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 感染手順

1. 非適応 DENV2 (PL046 株) ストック 9 (もともとは台湾の疾病管理センターから入手し、2.5 x 10⁷ から 1 x 10⁹ PFU/mL の範囲) を調製します。
2. ロズウェルパークメモリアルインスティテュート(RPMI)1640培地でウイルスストックを1 x 10⁶ PFUに希釈し、総容量40 μLにします。
3. 30 G 針を取り付けた 0.3 mL シリンジ 1 台に 10 μL (2.5 x 10⁵ PFU) の希釈ウイルスを充填し、別の 0.3 mL シリンジに 30 G 針を取り付けた 30 mL シリンジに 30 μL (7.5 x 10⁵ PFU) の希釈ウイルスを充填します。
4. 生後7日齢のICR(Institute of Cancer Research)の哺乳マウスを手に取り、以下の手順で行います。
   1. 脳内注射は、人差し指と親指で耳介を挟んでマウスを腹臥位に保持し、矢状縫合糸とラムドイド縫合糸の交点であるラムダ領域に希釈したウイルス10μLを脳内注射します。
   2. 脳内注射後、人差し指と親指でマウスを仰臥位に保持し、希釈したウイルス30μLをマウス腹部に腹腔内に穏やかに注入します
      手記：カニバリズムを避けるために、75%のアルコールを使用して、母親の嗅覚を一時的に失わせます。さらに、母親の便と尿でゴミを覆うことをお勧めします。
5. 哺乳マウスをケージに戻し、5分間待って、歩行や母乳の吸い込みなど、マウスの熱心さで刺激後の安全性を確認します。
   手記：ほとんどの場合、マウスは刺激後に正常な活動を示し、技術的なチャレンジ後に有害な影響はないようです。
6. マウスの日々の進行を、体重(マイクログラムバランスを使用)、急性ウイルス性脳炎様疾患(セクション2で説明した疾患スコアリングによる)、および生存率の観点から評価します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ロズウェルパークメモリアルインスティテュート1640ミディアム(RPMI)	ギブコ	11875-085	ウイルスの希釈
0.3 mLインスリンシリンジ	BDウルトラファインII	328838	脳内および腹腔内注射
振動 子	メトラー・トレドのLabX	AL104	ウェイトマウス
非適応DENV2(PL046株)	台湾疾病管理センター	-	マウスに感染する
がん研究所(ICR)の子育てマウス	BioLASCO台湾有限公司	-	私たちのマウスモデル