マウスモデルにおけるウイルス誘発性神経炎症の作製

要約

出典:Laval, K. et al.ウイルス誘発性神経炎症反応を研究するためのマウスフットパッド接種モデル。J. Vis. Exp.(2020年)。

このビデオは、マウスモデルでの神経炎症の生成を示しています。微小創傷を有する麻酔マウスを採取し、その創傷に偽狂犬病ウイルス(PRV)の接種液を塗布する。ウイルスは末梢神経に感染し、後根神経節(DRG)に広がり、さらに脊髄と脳に感染します。神経系のニューロンに感染すると、免疫応答が起こり、ニューロンの損傷が誘発され、神経炎症が引き起こされます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスフットパッドの擦り傷

1. C57BL/6 マウス (5 〜 7 週齢) をイソフルランガス麻酔薬で麻酔し、小さな麻酔システム (チャンバー) を介して 3% の投与量で送達します。
   1. マウスを仰向けの麻酔の手術面に置き、接種前に後足パッドに置きます。横隔膜(動物の銃口にフィットするのに十分なサイズのスリット)を備えたノーズコーンをマウスに取り付け、イソフルランガス麻酔薬を1.5%〜2.0%の一定用量で送達します。
   2. 鉗子でつま先を強くつまむことによって生じる痛みを伴う刺激に対するマウスの反応について、マウスを注意深く監視します。
2. 平らな鉗子で片方の後足を軽くつかみます。
   1. 後足の無毛の皮膚を、かかととウォーキングパッドの間にある約20倍、エメリーボード(100〜180グリット)でやさしく削ります。頻繁に摩耗させたり、圧力をかけすぎたりして出血を誘発しないでください。
   2. 細い鉗子を使って、擦り傷で剥がれた角質層をゆっくりと剥がし、地層の基部を露出させます。

2. PRVフットパッド接種

1. 2%ウシ胎児血清(FBS)と1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含むDMEM培地で、所望の力価に希釈したウイルス接種物を調製します(材料表)。
   1. PK15細胞上のウイルスストック中のプラーク形成単位(PFU)の数を定量化して、ウイルスの投与量を計算して標準化し、それに応じてウイルス接種物を希釈します
      手記： この研究では、PRV の毒性株 (PRVBecker) を 8 x 10⁶ PFU の用量で使用しました。この用量は、接種されたすべての動物が接種後82時間(hpi)に臨床症状を示すことを確認するために、以前の予備実験で最適化されました。
   2. ウイルスの接種物を氷の上に置き、穏やかに混ぜてから使用してください。
2. 20 μL のウイルス接種物 (8 x 106 PFU) の液滴をアブレーテッドフットパッドに加えます (局所投与)。模擬接種(中程度のみ)を並行して実施します。
3. 針の軸で10倍優しくこすり、ウイルスの吸着を促進します。針先で引っ掻かないでください。この手順を 10 分ごとに繰り返します。
4. 摩耗したフットパッドが乾くまで、マウスを30分間麻酔下に置きます。
5. 麻酔を停止した後、マウスが胸骨の横臥を維持できるようになるまでマウスを監視し、臨床フォローアップとサンプリングのために個々のケージに入れます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
C57BL/6マウス(5-7週間)	ジャクソン研究所
使い捨て滅菌ポリスチレンペトリ皿100 x 15 mm	シグマ・アルドリッチ	P5731500
ダルベッコのモディファイドイーグルミディアム(DMEM)	ハイクロン、GEヘルスケアライフサイエンス	SH30022
ダルベッコのリン酸バッファー生理食塩水 (PBS)ソリューション	ハイクロン、GEヘルスケアライフサイエンス	SH30028
ウシ胎児血清(FBS)	ハイクロン、GEヘルスケアライフサイエンス	SH30088
細かく湾曲したはさみステンレス鋼	FSTの	14095から11
イソセシアイソフルラン	ヘンリー・シャイン	NDCの11695-6776-2
マイクロ遠心チューブ 2ml	デンビルサイエンティフィック	1000945
マイクロチューブ 1.5ml	ザルシュテット	72692005
ペニシリン/ストレプトマイシン	ギブコ	154022
プレシジョングライドニードル 18G	BDの	305196