マウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

Abstract

出典:Schmitz, K., et al.マウスの多発性硬化症のEAEモデルにおける視神経炎と脳炎症の生物発光と近赤外線イメージング。J. Vis. Exp (2017).

このビデオでは、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を使用して多発性硬化症のマウスモデルを確立しています。マウスにニューロンペプチドとアジュバントを含むエマルジョンを注入すると、自己反応性T細胞を活性化する免疫応答が引き起こされます。これに続いて、百日咳毒素(PTX)を注射して血液脳関門の透過性を高め、自己反応性T細胞が脳に浸潤できるようにします。この浸潤は、最終的にミエリン損傷をもたらすシグナル伝達カスケードを開始し、多発性硬化症の脱髄状態を模倣しています。

Protocol

1. SJL/JマウスにおけるEAE誘導

1. マウス
   1. 11週齢の雌SJL/Jマウスを使用し、約7日間実験室に慣れさせます。グループごとにn = 10匹のマウスを使用します。
   2. 薬物効果を評価するには、免疫の3日後または5日後から、対照群の薬物とプラセボを飲料水または食品ペレットを介して継続的に投与します(グループあたりn = 10)。病気のピーク時には、牛乳または3%砂糖水に浸したコーンフレークと一緒に薬またはプラセボを投与します。
2. 予防接種材料
   1. 完全なフロイントのアジュバント(CFA、加熱死結核菌H37 Ra)と凍結乾燥百日咳毒素(PTX)の2つのバイアル(各5μg)を含むエマルジョン中の抗原(プロテオリピッドタンパク質のペプチド、PLP139-151、1 mg / mLエマルジョン)からなるEAE誘導キットを使用します。.
   2. PTX(2 μg/mL)をリン酸緩衝生理食塩水1倍に溶解します(PBS、すなわち、各PTXチューブに1.5 mLのPBSを添加し、よく混合し、同じピペットチップで除去し、50 mLチューブにPBS1 mLを加えます)よく混合します。
3. 予防接種
   1. PLP / CFAを2つの部分に分けて、それぞれ100μLで、どちらも尾の付け根に皮下注射します。
   2. 100 μL の PTX をマウスあたり 2 回、最初の 1 - 2 時間後に、2 回目は 24 時間後に腹腔内 (i.p.) に注入します。
   3. 対照マウスには、PLPなしのCFA(100μLの2つの部分)とPLPなしのPTXを注入します。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
PLP139-151/CFAエマルジョン	Hooke Labs、マサチューセッツ州セントローレンス	EK-0123	EAEインダクションキット
百日咳毒素	Hooke Labs、マサチューセッツ州セントローレンス	EK-0123	EAEインダクションキット
IVISルミナスペクトラム	Perkin Elmer, Inc.、ウォルサム、米国		生物発光・赤外線イメージングシステム
LivingImage 4.5 ソフトウェア	Perkin Elmer, Inc.、ウォルサム、米国	CLS136334	IVIS解析ソフトウェア
イソフルラン	Abbott Labs(米国イリノイ州)	26675-46-7	麻酔剤