反応性星膠症を誘発するためのマウスモデルにおける皮質刺し傷の発生

Abstract

出典:Allahyari, R. V. et al. Triggering Reactive Gliosis In Vivo by a Forebrain Stab Injury. J. Vis. Exp. (2015)

このビデオは、頭蓋骨の露出と脳病変の作成を含む、マウスの皮質刺し傷の手順を示しています。アストロサイトの神経保護反応である反応性アストログリオーシスを誘導し、中枢神経系の外傷、炎症、修復メカニズムを研究します。

Protocol

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 手術用マウスの準備

1. マウスをホームケージから取り外し、体重を量ります(g)。
2. マウスをイソフルラン誘導チャンバーに入れ、酸素を2 L / minに、イソフルラン気化器を5に設定して、麻酔の手術面を約3〜5分導入します。マウスがつま先のピンチ反射を使用して完全に鎮静していることを確認します。
3. マウスが完全に鎮静されたら、マウスを定位固定フレームに入れ、イソフルランにチューブで取り付けられているノーズコーンに鼻を固定します。イヤーバーを外耳道に挿入して締め、頭が安定していることを確認します。
4. 耳から耳へ、そして目の間から耳の後ろまで頭を剃ります。
5. イソプロピルアルコールとベタジンヨウ素溶液を交互に3回ずつワイプして皮膚を滅菌します。
6. 手術中に両目が乾燥するのを防ぐために、両目に人工涙液を塗布します。

2. 外科手術

1. つま先や尻尾をつまんで麻酔の深さを監視します。マウスは、反応がなく、呼吸が遅く均一であるときに適切な手術面にいます。
2. 11番メスの刃を使って、目のすぐ後ろ....

Results

図1:開頭術の領域を示すマウスの頭蓋骨の概略図。 青い線は、掘削する領域の境界を識別する最初のマーキングを示しています。上部と左のマークは、それぞれ冠状縫合糸または矢状縫合糸の 1 mm 下または横方向に測定されます。下部と右側のマークは、冠状縫合糸と矢状縫合糸からそれぞれ4mmで測定されます。開頭術は、マークされた境界(点線)内に円をドリルで開けることによって行われ、直径約3mmの開頭術(破線)が作成されます。概略図は縮尺になりません。

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ステレオタックス	ハーバード大学装置	726049
高速マイクロドリル	ハーバード大学装置	724950
ステンレス製メス刃、#11	メドベット	JOR581S
5/45角度付き鉗子	ファインサイエンスツール	11251から35
ゲルフォームスポンジ 12cmx7mm	漁夫	NC9841478
抗体およびその他の試薬	生産者	カタログ番号	希釈(明視野) 希釈(蛍光)
RbアンチGFAP	だこ	Z033429-2	1:20k 1:1キロメートル競走
SHP反BrdU	アブカム	AB1893	1:2K 1:500
ビオチン化ヤギ抗ウサギ	ベクターラボラトリーズ	BA-1000	07:40
ビオチン化ウサギ抗羊	ベクターラボラトリーズ	BA-6000	07:40
Alexafluor 488ヤギ抗ウサギ	ライフテクノロジー	A-11008	07:40
Alexafluor 568ロバアンチシープ	ライフテクノロジー	A-21099	17:40
DAPI核酸染色剤	ライフテクノロジー	D3571	17:40
クレシルバイオレットアセテート	シグマ・アルドリッチ	C5042-10G	1%