側方流体打楽器装置を用いた外傷性脳損傷のマウスモデルの生成

Abstract

出典:Wen, L., et al. マウスにおける外傷性脳損傷後の盲腸微生物叢の変化の調査。 (2019年)。

このビデオでは、側方流体打楽器装置(LFPI)を使用して外傷性脳損傷(TBI)のマウスモデルを生成する方法を示します。マウスに麻酔をかけると、頭蓋骨に窓を作ることで脳が露出します。生理食塩水で満たされたカニューレが窓に取り付けられ、LFPIに接続されます。デバイスの振り子が解放され、外傷性脳損傷を引き起こす圧力パルスが生成されます。

Protocol

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 動物の世話

1. この実験では、5〜6週齢の雄C57BL / 6Jマウス(体重20〜25 g)を使用します。
2. マウスを12時間/12時間の明暗サイクルで維持し、餌と水を自由に受け取ることを確認します。研究全体を通して、偽グループとTBIグループの両方に同じ量の食物と水を提供します。
3. 動物の痛みや不快感を最小限に抑えるためにあらゆる努力をしてください。

2. 外傷性脳損傷の誘発

1. 麻酔のためにケタミン(80-100 mg / kg)/キシラジン(10 mg / kg)IPを注射します。眼球反射または疼痛反射を使用して麻酔の深さをテストします。人工涙液または潤滑剤の眼軟膏を使用して、目が乾燥しないようにします。
2. 麻酔後、マウスを腹臥位に置きます。温度制御された加熱パッドを使用して、手術中およびTBI後30分間、温度を37°Cに保ちます。
3. 切開部の毛を剃ります。
4. 3つの交互のスクラブを使用して70%エタノールで頭皮を消毒し、矢状面で頭皮を切開します。.
5. 鉗子を使用して両側の切開部を引っ込め、骨膜をわずかに分離します。
6. マーカーを使用して、正中線から2mm離れた頭蓋骨の右頭頂部に円(直径3mm)を描きます。
7. 電気ドリルで頭蓋骨をドリルします。硬膜が損傷しないように、この手順を慎重に操作していることを確認してください。
8. 骨フラップを取り外し、小さな骨窓(直径3mm)を露出させます。
9. プラスチック製の損傷カニューレ(内径= 2.5 mm、長さ= 8 mm)を開頭術の上に配置し、歯科用アクリルを使用してカニューレを頭蓋骨にセメントで固めます。
10. シリンジ(5mL)を使用して滅菌済みの0.9%NaCl(生理食塩水)をカニューレに充填し、カニューレに気泡がないことを確認します。
11. オシロスコープと amplifier、LFPIデバイスの高圧チューブに気泡がないことを確認します。安定した信号が得られるまで約10パルスを配信して、デバイスをテストします。振り子の開始位置の角度を調整して、約2.0気圧のパルス強度に達します。
12. 損傷カニューレをLFPIデバイスに接続します。引き金を引いて振り子を離すことで脳損傷を誘発します。次に、パルスを取得し、閉じた液体充填チューブシステム全体を通じて硬膜に伝達します。
13. 偽群のマウスを同じ外科的処置で操作します。LFPIは実行しないでください。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ヒーティングパッド	上海安全生物科股份有限公司	TR-200	ヒーティングパッド
インジェクター	浙江大学医学部初の付属病院		インジェクター
LFPIデバイス	バージニア州 コモンウェルス大学	FP302	LFPIデバイス
マイクロ頭蓋ドリル	RWDライフサイエンス	78061	マイクロ頭蓋ドリル
ポビドンヨウ素	浙江大学医学部初の付属病院		ポビドンヨウ素