Cre-LoxPを介した脳海綿状奇形のマウスモデルにおける誘導

要約

出典:Choi, J. P., et al.マウスモデルにおける脳海綿状奇形の誘導およびマイクロCTイメージング。J. Vis. Exp.(2017年)

このビデオでは、遺伝子組み換えマウスの仔マウスに、loxP部位とエストロゲン受容体に融合したCre組換え遺伝子を持つマウスの仔を使用して、脳海綿状奇形(CCM)を誘発しています。4-ヒドロキシタモキシフェンの投与は、内皮細胞のCreを活性化し、Ccm2の欠失と脳内のCCMの形成につながります。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスモデルにおける脳海綿状奇形またはCCMの誘導

1. クロス CDH5-CreErt2;Ccm2fl/fl マウス with Ccm2fl/fl は、Cdh5-CreErt2 で同腹子を生成します。Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) の子犬と同腹仔コントロール (Ccm2fl/fl)。Cdh5-CreErt2およびCcm2fl/fl動物は以前に記載されている19。
2. 4HTを100%エタノールに溶解し、30μLの4-ヒドロキシタモキシフェン(4HT)(濃度:10 mg / mL)のアリコートで-80°Cで保存します。使用日当日は、4HTをコーン油(0.5 mg / mL)で希釈してください。
3. 50 μL の 4HT (0.5 mg/mL) を新生児の子犬に P1 で胃内に注射し、インスリン注射器を使用して実験的 CCM 病変を誘導します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
4-ヒドロキシタモキシフェン	シグマ・アルドリッチ	H6278-J	Cdh5-CreErt2をアクティブにするには
コーン油	シグマ・アルドリッチ	C8267-500ミリリットル	4-ヒドロキシタモキシフェンを希釈するには
インスリン注射器