血管内穿孔によるマウスモデルにおけるくも膜下出血の誘発

要約

出典:Liu, S., et al.くも膜下出血の血管内穿孔モデルと磁気共鳴画像法(MRI)の組み合わせ。J. Vis. Exp. (2021).

このビデオは、マウスモデルでの血管内穿孔によるくも膜下出血の誘発を示しています。麻酔をかけたマウスの頸部領域を切開して、総頸動脈とその分岐部にアクセスします。動脈からフィラメントを挿入して頭蓋内動脈の枝を穿孔し、くも膜下出血を誘発します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 動物の調理法

1. ケタミン(70 mg / kg)とキシラジン(16 mg / kg)を腹腔内に注射して麻酔を誘発します。.体温を正常に保ち、深部麻酔の迅速な導入に貢献します。つま先をつまむなどの痛みの刺激で適切な鎮静をテストし、反応がないことを確認します。
2. マウスの首毛をカミソリで丁寧に剃り、70%エタノールで洗浄し、続いてベタジン/クロルヘキシジンで洗浄し、局所的な痛みをコントロールするために皮膚表面に1%リドカインを塗布します。
3. マウスを仰臥位に置きます。テープを使用して手足と尻尾を固定し、首の皮膚を手術の反対側にそっと伸ばします。同時に、首を少し上げます。
4. 眼科用軟膏(例:.、5%デクスパンテノール)を使用して、手術中の目の脱水を防ぎます。.

2. SAH誘導

1. あごから胸骨の上端(1.5 cm)まで滅菌メスで首の皮膚を開き、唾液腺を周囲の結合組織から鈍く分離します。
2. 気管の片側(この場合は右側)に沿って筋肉群を分離し、栄養のある血管と細静脈で覆われた総頸動脈(CCA)鞘を露出させます。CCAと神経は互いに近接して位置しています。
3. CCAを解散し、8-0を空けるCCAの周りの絹の縫合糸は、事前に結紮せずに。迷走神経は損傷を受けやすいため、迷走神経の保護に注意してください(図1A)。
4. CCA、内頸動脈 (ICA)、および外部頸動脈 (ECA) の三重分岐部は、拡張筋の下後部 3 分の 1 に沿って見えます。ECAの遠位端を解剖し、血管をできるだけ遠位に2倍に結紮します。
5. 2回結紮されたセグメントの中点でECAを切断し、血管の切り株を作成します。
6. ECA切り株の周りのフィラメントの1つのライゲーションを事前に配置し、フィラメントの挿入が成功するまで閉じないでください。
7. 縫合糸またはマイクロクリップを使用して、ICAとCCAを一時的に閉塞します(図1B)。
8. 微小血管ハサミを使用して、ECAに小さな切開(ECA直径の約半分)を行います。5-0(または4-0)プロレンフィラメントをECAに挿入し、CCAに進みます。
9. ICAとCCAのマイクロクリップを緩めながら、ECAの結紮糸を少し閉じます(図1C)。
10. フィラメントをゆっくりと引き戻し、ECAの切り株を頭蓋方向に調整し、分岐部を通じてフィラメントをICAに陥入させます(図1D)。
11. フィラメントの先端を気管正中線に対して~30°、水平面に対して~30°の角度で内側に向けます。フィラメントをICA内で前方に押し込みます。前大脳動脈 (ACA) - 中大脳動脈 (MCA) の分岐部に到達した後、抵抗が発生します (~9 mm)。
12. フィラメントをさらに3 mm進め、右側のACAに穴を開けます。フィラメントをECAの切り株に速やかに引き抜き、くも膜下腔に血液が流れるようにします。
13. フィラメントをこの位置に約10秒間保持します(図1E)。筋肉の震え、同側縮瞳、息苦しさ、心臓のリズムの変化、尿失禁の存在は、手術が成功した証拠を裏付けることができます。
14. 過剰な失血を避けるために、CCAを一時的に閉じます。フィラメントを即座に引き出し、事前に用意された縫合糸でECAを結紮します。CCAを再度開き、くも膜下腔への血液の再灌流とさらなる滲出液を可能にします(図1F)。
15. 出血漏れを確認した後、術後の皮膚感染を防ぐために創傷周囲の皮膚を消毒し、非吸収性の4-0ポリエステル繊維縫合糸で創傷を縫合します。
16. 意識が回復するまで、マウスをサーマルボックスに入れます。動物が完全に目覚めるまで待ち、胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻したことを確認します。完全に回復するまで、動物を他のマウスの会社に戻さないでください。
17. 術後の痛みの緩和のために200-300 mg / kg体重パラセタモールを投与します。.
18. 手術後は毎日マウスの様子をチェック。

結果

図1:外科手技のステップバイステップの画像。(A)露出した右頸動脈の解剖学的構造の描写:CCAとそのICAおよびECAへの分岐、およびECAの小さな枝(OAおよびSTA)が識別されます。(B)ECAは周囲の組織から動員され、切断する前に2つの縫合糸で結紮されます。3 番目のライゲーションは、分岐部を閉塞せずに分岐部の近くに緩く配置する必要があります。(C)ICAとCCAは、ECAを慎重に切開するときに過度の出血を防ぐために、一時的に(結紮またはクリップのいずれかで)閉塞されます。(D)フィラメントはECAに挿入され、CCAに進められます。事前に準備された結紮は、血液の滲出液が発生しないように慎重に締める必要がありますが、フィラメントを前進させることは可能です。(...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
アイクリーム	バイエル	815529836	ベパンテン
結紮縫合糸 (5-0)	SMIの		シルクブラックUSP
顕微鏡用光源	ツァイス	CL 6000 LEDシリーズ
ケタミン	CPファーマ	〒797-037	100 mg/mL
パラセタモール(40 mg / mL)	bene Arzneimittel	4993736
プロレンフィラメント (5-0)	エルヒコン	EH7255
剃刀	ウエラ	HS61
手術器具(細ハサミ)	FSTの	14060から09
手術器具(鉗子#1)	AESCULAP (エースキュラップ)	FM001Rの
手術器具(鉗子#2)	AESCULAP (エースキュラップ)	FD2855R
手術器具(鉗子#3)	ハンマッハー	HCS 082-12
手術器具(ニードルホルダー)	FSTの	91201から13
手術器具(バンナススプリングハサミ)	FSTの	15000から08
手術用顕微鏡	ツァイス	ステミ 2000 C
創傷縫合糸(4-0)	エルヒコン	CB84Dの
ザイラベ	CPファーマ	〒797-062	20 mg / mL