ラットにおける胸部脊髄半解剖手術の実施

要約

出典:Brown, A. R., et al., ラットにおける胸部脊髄半解剖手術とオープンフィールド自発運動評価. J. Vis. Exp. (2019).

このビデオは、ラットで胸部脊髄半肉片を行うための外科的手順を示しています。T8脊髄セグメントを露出させ、片側の神経管を破壊するための半切開を行い、術後ケアを提供する手順を概説しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 胸部半郭清手術

1. 手術のための無菌環境を維持するために、適切な保護具(手袋、マスク、ガウン)を着用してください。アルコールワイプで手術部位を清掃し、滅菌済みの手術用ドレープを手術野の上に置きます。手術器具を滅菌し、手術野に置きます。
2. イソフルランガス(3%誘導、0.5-3%維持)と酸素(1L /分)の混合物下でラットを麻酔します。つま先のピンチと角膜反射の反応がないことを確認することにより、適切な外科的麻酔の深さを確認します。手順全体を通してラットを継続的に監視し、外科的麻酔薬の深さを維持するために必要に応じて麻酔薬の送達量を調整します。
3. 股関節と首の間の背側幹を剃り、ラットを手術野に置き、切開部位をアルコールワイプと潰し剤溶液で消毒し、直腸体温計によって監視されるフィードバック制御加熱パッドを使用して深部体温を37°Cに保ちます。
4. 眼科用軟膏を目に置き、水分を保ち、必要に応じて手術中に再塗布します。
5. T6−T10椎骨をメスで覆うように皮膚に2.5cmの切開を行います。鈍い解剖ハサミを使用して皮膚と表面脂肪を引っ込めます。
   注: T6−T10 椎体節は、2^nd 胸椎の顕著な隆起から頭蓋骨の基部から背側脊椎節を穏やかに触診することで吻側に識別することができます。または、最も後部に浮いている肋骨を触診することで尾側に識別でき、これにより 13^th 胸椎の動きが誘発されます。
6. T7-T9椎骨の背側に挿入する傍脊椎筋を、鈍い解剖ハサミと自己保持リトラクターを使用して分離します。細い鉗子と綿の先端のアプリケーターを使用して、残りの組織を創面切除し、棘突起と椎骨椎弓板を露出させます。
   注: この手順と次のステップは、顕微鏡による可視化 (~5−15x) によって大いに助けられます。
7. 繊細な骨トリマーを使用して、T7椎骨とT8椎骨のファセット(接合体関節)を両側に慎重にカットします。T8とT9の椎骨板の間の背側結合組織をメス(深さ1mm)で表面的に切断し、下にある臍帯を傷つけないように注意します。
8. T8椎骨の棘突起を骨トリマーで取り除きます。湾曲した止血鉗子をT7棘突起に慎重に固定し、T8椎弓板の尾側端をわずかに吻側(~20°)に回転させ、T8椎弓板の下に骨トリマーを挿入し、椎弓板に沿って伸びる正中線をカットします。椎弓切除術を続行するには、脊椎椎板の内側の内側の左側と右側の切り傷を繰り返して、脊髄を露出させます。
   注:椎弓切除術で生じた骨の破片をすべて取り除くように注意してください。
9. 露出した脊柱管にリドカイン(2%、0.1mL)を点滴し、細い鉗子と虹彩切除ハサミを使用してT8脊椎セグメントを覆っている硬膜を切除します。露出したコードにリドカイン投与を繰り返し、露出したT7-T9椎骨の間に伸びる棘突起間に作成された中心線を視覚化することにより、コードの正中線を特定します。.
   注: T7 と T9 の棘突起に加えて、T8 の露出した後根神経節も正中線の識別を助けるために使用できます。30 Gの針をコードの正中線に配置して、その後の半切開を助けることができます。
10. 解剖ナイフで脊髄を正中線から片側に向かって半角分離します。腹側の前脊髄動脈を切らないように注意してください(椎体にしっかりと圧力をかけないでください)。虹彩切除術のハサミを使用して、脊髄の病変側に残っている組織を慎重に切断し、腹外側象限が適切に切除されていることを確認します。
11. 脊髄の上の露出した空洞に滅菌生理食塩水に浸した止血スポンジ(~6 x 2 mm)を置き、筋肉層(4-0ポリグラクチン910)を縫合します。次に、切開部位の周りの皮膚を縫合します。
12. 適切な鎮痛剤(ブプレノルフィン0.05 mg / kg皮下[皮下[皮下])、抗生物質(エンロフロキサシン、10 mg / kg皮下)を提供し、手術直後に5 ccの乳酸リンゲル液(腹腔内[i.p.])で失われた水分を補充します。.
13. ラットを麻酔から外します。動物が完全に目覚めるまで、ラットを温熱パッドまたはランプ(~33°C)の下の暖かい環境に置きます。
14. 術後最初の3日間は毎日鎮痛剤を補充し、痛み、体重減少、不適切な排尿、感染症、創傷治癒の問題、またはオートファジーの兆候を継続的に監視します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
バイトリル	CDMV	11242
鈍い解剖ハサミ	世界の精密機器	503669
ブプレノルフィンヒドロチョリド	CDMV
圧縮酸素ガス	プラクセア
コットンチップアプリケーター	CDMV	108703
デリケートなボーントリマー	ファインサイエンスツール	16109-14
解剖ナイフ	ファインサイエンスツール	10055-12
デュモンファイン鉗子	ファインサイエンスツール	11254-20
Ethicon Vicryl 4/0 バイオレット編組 FS-2 縫合糸 (J392H)	CDMV	111689
フィードバック制御加熱パッド	ハーバード・デバイス	55-7020
メスのロングエバンスラット	チャールズリバー研究所	ひずみコード: 006	225-250g
ゲルフォーム	CDMV	102348
湾曲止血鉗子	ファインサイエンスツール	13003-10
ホットビーズ滅菌器	ファインサイエンスツール	18000-45
ハイドロゲル	70-01-5022	クリアH20
イソフルオラン	CDMV	118740
乳酸リンガー液	CDMV	116373
リドカイン (2%)	CDMV	123684
ニードル 30 ga	CDMV	4799
眼科用軟膏	CDMV	110704
生理食塩水	CDMV	1399
プロビオジン	CDMV	4568
げっ歯類の流動食	バイオサーブ	F1268
スカルパルブレード #11	CDMV	6671
自己保持型リトラクター	世界の精密機器	14240
バンナス虹彩切除術スプリングハサミ	ファインサイエンスツール	15002-08
獣医用麻酔器とイソフルアラン気化器	ディスポメ	975-0510-000