マウスにおけるペンチレンテトラゾール誘発性てんかん発作モデルの確立

要約

出典:Shimada, T., et al. ペンチレンテトラゾール誘導キンドリングマウスモデル。J. Vis. Exp. (2018).

このビデオでは、GABA-A受容体拮抗薬であるペンチレンテトラゾール(PTZ)注射を用いてマウスでてんかんを誘発する過程を実演しています。PTZの腹腔内反復投与は、塩化物イオンの流入を阻害し、抑制性神経伝達を阻害し、発作を引き起こすニューロンの過興奮を引き起こすことにより、発作の閾値を徐々に低下させます。このプロセスは、慢性てんかんを模倣した自然発作の発散と発症をもたらします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ペンチレンテトラゾール (PTZ)

の調製

1. 2 mg/mL PTZ を滅菌 0.9% (w/v) NaCl に溶解します。使用当日にPTZを準備してください。

2. PTZ

の注入

1. すべての実験は午前9時から午後12時(正午)の間に行ってください。
2. 動物の体重を測定します。
3. 動物を観察室に入れて慣れさせます。
4. 慣れ期間(3分)中に、動物の体重と以前に決定された注射用量に基づいて、注射用のPTZ溶液の量を計算します。
   注: 例えば、35 mg/kg PTZを使用する場合、体重25 gのマウスには0.875 mgのPTZが必要です(35 mg/kg x 0.025 kg = 0.875 mg)。したがって、437.5 μL の 2 mg/mL PTZ 溶液を注入する必要があります (0.875 mg/2 mg/mL = 0.4375 mL)。PTZの注射用量は、マウスの遺伝子型と系統によって異なります。野生型C57....

結果

図1:プロトコルの簡単な説明。(A)PTZ媒介キンドリングの概略図。(B)各発作スコアの代表的な動物行動の図。

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材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ペンチレンテトラゾール	シグマ・アルドリッチ	P6500
塩化ナトリウム	マナック	7647-14-5
マウス	クレアジャパン		C57Bl/6NJcl、生後8週間、オス
シリンジ (1mL)	テルモ	SS-01T
ニードル(27G x 3/4") (0.40 x 19 mm)	テルモ	NN-2719S
はかり	メトラー	PE2000	こちらの商品は生産終了商品です。A&D社のFX-2000iとFXi-12-JAとほぼ同等です。