出典:Lin, Y., et al., Rearsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release. J. Vis. Exp. (2018)
このビデオは、トランスフェクションされた後根神経節細胞を使用して、神経ペプチド受容体アゴニストで神経伝達物質の放出を研究する方法を示しています。
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方法論記事
神経ペプチド受容体アゴニストを用いた後根神経節感覚ニューロンの刺激
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2025年7月8日
この記事について
要約
プロトコル
1. 初代DRG細胞からの神経伝達物質の放出
- 6日目に、細胞をプレーティングした後(siRNAトランスフェクションの72時間後)、培養培地を200μLの無血清培地に変更し、細胞を37°CのCO2インキュベーターで30分間インキュベートします。
- 1 μLの刺激化学薬品を加え、ピペッティングで培地を穏やかに混合します。37°CのCO2インキュベーターでディッシュを指定の時間インキュベートします
手記：本稿では、NPFFR2アゴニストであるdNPA(D.Asn-Pro-(N-Me)Ala-Phe-Leu-Phe-Gln-Pro-Gln-Arg- Phe-NH2, 5 nmol)で培養細胞を1時間刺激しました。 - 培養皿から培地を回収し、5,000 x gで4°Cで5分間遠心分離して、懸濁した不純物を取り除きます。
- 遠心分離から上清を採取し、必要に応じてサンプルをリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で希釈します。次に、酵素免疫測定法(EIA)キットを使用して、神経伝達物質のレベルをアッセイします
手記：ここでは、上清を1:100に希釈してから、CGRPのレベルを分析しました。上清は、SPのレベルを分析する前に希釈されませんでした。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| DMEM-F12 | インビトジェン | 12400024 | カルチャーメディウム |
| ハンクの平衡塩溶液 | インビトジェン | 14170-112 | カルチャーメディウム |
| パスツールピペット | ヒルゲンベルク | 3150102 | 細胞トリチュレーション |
| dNPA | ジェネメド合成 | 該当なし | NPFFR2 アゴニスト |
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