アンジオテンシンII誘発高血圧マウスモデルにおける腎動脈の交感神経除神経

要約

出典:Wang, M., et al., Improved Renal Denervation Mitigated Hypertension Induced by Angiotensin II Infusion. J. Vis. Exp. (2022)

このビデオでは、アンジオテンシンII誘導高血圧マウスモデルで、フェノールを使用して交感神経機能を破壊し、血圧を下げる腎動脈交感神経除神経の手順を示しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 両側腎除神経

1. Ang II注入の1週間後に、血圧(BP)≥140/90mmHgまたは収縮期血圧/拡張期血圧が25%増加したマウスを選択します。
2. 手術前に動物の体重を記録し、腎除神経手術には最低体重24gの動物を選択します。
3. ペントバルビタールナトリウムを使用してマウスを麻酔します。ネガティブなつま先つま先つまみ反射で麻酔の深さを確認します。
4. 腹部の毛をシェーバーで取り除きます。この手順を慎重かつ徹底的に実行して、外科的汚染を回避してください。
5. マウスを手術台に置き、腹部を上に保ったまま、手足をテープで固定します。腹部の皮膚をポビドンヨードで消毒し、続いて70%エタノールで3回ワイプします。
6. メスの刃を使用して、腹側正中線を2cmの腹部切開します。37°Cの生理食塩水に浸したガーゼで腸を引き戻し、左腎動脈を露出させます。湾曲したピンセットを使用して、腎臓動脈から脂肪を慎重に、しかし単刀直入に解剖します。(図 1A-C です。
7. 計量紙を腎臓動脈と同じ大きさの長方形に滅菌した鋭利なハサミで切ります。参考までに、図1Cの点線で示されているのと同じサイズで計量用紙をカットします。
   注: 同じ形状を保つために、一度に数枚の計量紙をカットしようとする手術の重要な部分です。
8. 計量紙を10%フェノール/エタノール溶液に少なくとも30秒間浸します。左腎動脈の表面を覆い、血管を計量紙で包み、2分間保持します(図1D)。ガーゼを使用して周囲の組織を保護し、計量紙が周囲の腎臓や腸に触れないようにします。
   注: フェノール溶液はプラスチックチューブ内で安定していますが、ガラスバイアルでは安定していません。したがって、溶液はすべての実験で新たに調製する必要があります。
9. 右腎動脈についても同じ手順を実行します。生理食塩水に浸した計量紙で偽の手術を行います。
10. 筋肉を初期位置に再配置し、中断された縫合糸で6-0 Vicryl縫合糸で腹膜を閉じます。次に、中断された4-0ナイロン縫合糸で皮膚を閉じます。完全に回復するまで、すべてのマウスを監視します。

2. 術後のケア

1. 切開部にポビドンヨードを塗布し、回復と術後のモニタリングのために動物を温めた電気毛布に入れます。
2. マウスを1日2回監視して、発赤、腫れ、痛み、腹部感染症がないか評価します。メロキシカム(0.5 mg / kg、SC)をRDN手順の約1時間前と24時間後にすべてのマウスに投与します。.

結果

図1:計量紙を使用したRDNの手順。(A,B)C57BL/6 (ex vivo) マウスの腎動脈の解剖学的画像。(C)2本の点線内の部分は、計量紙で覆われている領域を示しています。(D)両側腎動脈の表面を、10% フェノール/エタノール溶液に浸した適切な計量紙で覆います。点線を超えて濾紙を覆わないでください。*は計量用紙を示します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
アンジオテンシンII	サンゴンバイオテック	CAS:4474-91-3	高血圧アニモールモデルを作るには
血圧分析	ビジテックシステムズ	BP-2000	マウスの血圧を測定
ミニ浸透圧ポンプ	株式会社デュレクト	CA 95014	アンジオテンシンIIを充填する
計量ペーパー	サンゴンバイオテック	F512112	フェノールを浸した計量紙で腎神経を破壊する。https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112。