ラットの聴覚皮質除去のための定位誘導アブレーション技術

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ネズミの準備

注:ホルモンの変化を避けるために、雄のラットで実験を行いました。

1. 筋肉内に注射された塩酸ケタミン(30 mg / kg)と塩酸キシラジン(5 mg / kg)の混合物を使用して動物に麻酔をかけます。この用量では、ラットは約1時間深く麻酔する必要があります。
2. ネズミのつま先をつまみます。離脱反射がないことは、動物が完全に意識を失っていることを示しています。ラットがピンチに反応した場合は、初期用量の3分の1で補助麻酔を行います。.
3. 頭皮を剃り、ポビドンヨードで手術部位を消毒します。
4. 動物を加熱パッドの上に置いて38°Cの温度を維持し、2本のイヤーバーとバイトバーを使用して定位固定装置フレームで動物の頭を安定させます。耳のバールで鼓膜を突き刺さないように注意してください。
5. 眼科用ジェルまたは血清生理食塩水を各目に一滴垂らして、目を保護します。

2. ラットの側頭骨におけるACの位置

1. メスを使用して、正中線に沿って切開を行い、頭蓋骨を露出させ、頭蓋骨の表面を覆っている骨膜を引っ込めます。
2. 滅菌綿の先端を使用して、頭蓋骨の表面を覆っている血液を優しく取り除き、ラットの脳のPaxinosとWatsonのアトラスに従って、ブレグマ、ラムダ、および両耳間0を視覚化します。
3. メスで頭蓋骨の背側挿入部近くの側頭筋を切開します。針と縫合材を使用して筋肉を引き出し、縫合材を定位フレームに固定します。これにより、側頭骨が露出します。出血が発生した場合は、冷たい滅菌生理食塩水ですすいでください。
4. 定位マイクロマニピュレーターに滅菌済みの直針をセットし、完全に固定されていることを確認します。
5. 針が頭蓋骨の表面の真上に来るまでゆっくりと針を下げ、針の先端が前耳間0になるようにします。この点を 0 (ゼロ) に設定し、この点から座標を決定します。
6. 関心のある脳の領域に応じて、定位座標を変化させます。ラットの脳のPaxinosおよびWatsonのアトラスを利用してこれらの座標を決定する。座標が決定したら、それらの座標に一致するように針を動かします。
7. 次の4つのポイントの座標を使用してACをターゲットにします:A:前後(A / P)= -5.8 mm、中外側(M / L)= +/- 6.4 mm;B:A / P = -2.7 mm、M / L = +/- 6.4 mm;C:A / P = -2.7 mm、M / L = +/- 8.67 mm;D:A / P = -5.8 mm、M / L = +/- 8.67 mm。針を側頭骨の真上に下げて、これら4つのポイントのそれぞれを視覚化します。マーカーペンを使用して、側頭骨上の点をマークし、それらを接続して長方形を描きます。長方形は、ボーン内の窓を開くためのガイドとして機能します (図 1

3. AC

1. 電動ドリルと小さなドリルビット(0.6mmØ)を使用して窓を開けます。骨が崩れるまで、長方形の周囲を8,000rpmでドリルで穴を開けます。皮質下構造の損傷を防ぐために、冷たい滅菌生理食塩水ですすいで穴あけ面を冷却します。骨が崩れると、抵抗の低下を検出できます。脳をドリルしないように注意してください。
2. 境界線が緩んでいる場合は、細かい鉗子で覆っている骨を引き上げ、冷たい滅菌生理食塩水で保管します。

4. AC

1. 手術用顕微鏡(10X)を使用して、マイクロメスナイフで髄膜を優しく切り、先の尖った2つの鉗子を使用して髄膜を取り除きます。出血が発生した場合は、冷たい滅菌生理食塩水ですすいでください。
2. 滅菌済みの20Gの鈍い先端針に結合された外科用吸引装置(圧力-0.24バール)を使用して、ACを穏やかに吸引します。この点は非常に重要であり、非常に慎重に実行する必要があります:6つの皮質層のみを吸引し、下にある白質は吸引しません。
3. 穿孔動脈の出血が止まるまで吸引します。
4. 吸引が終了したら、負傷した部分を抽出した骨で覆い、吸収性止血ガーゼを塗布します。
5. 側頭筋を元の位置に戻してから、創傷クリップ(9 mm)を使用して皮膚を縫合します。抗生物質軟膏を塗ります。1日2回、3日間、傷口に軟膏を塗り続けます。
   注: 各塗布は、傷口に薄い層を塗布したものです。
6. 手術後1時間後に鎮痛剤としてラットの背部にブプレノルフィン(0.05 mg / kg)を皮下注射し、その後72時間中は8時間ごとに注射します。
7. 動物が目を覚ますまで動物を加熱パッドの上に置いたままにし、回復するために飼育ケージに戻します。

図1:3つの異なる外科的ステップでのラットの側頭骨の画像。 (A) ACの定位固定座標を側頭骨に伝達します。4つのポイントの座標は次のとおりです:A:A / P = -5.8 mm、M / L = +/- 6.4 mm;B:A / P = -2.7 mm、M / L = +/- 6.4 mm;C:A / P = -2.7 mm、M / L = +/- 8.67 mm;D: A/P= -5.8 mm, M/L= +/- 8.67 mm. (B) 座標は、窓の開口部をガイドする側頭骨の表面に長方形を描くための基準として使用されます。(C)ドリル後にボーンで開いたウィンドウを表示します。血管を持つ髄膜は脳の表面で観察できます。R:吻側、D:背側。