方法論記事

スレッドボルトを用いた中大脳動脈閉塞による虚血性脳卒中誘発

2025年7月8日

この記事について

要約

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出典:Liu, P., et al., ラットの急性脳卒中後の脳の回復を評価するための前臨床モデル。J. Vis. Exp. (2019)

このビデオでは、スレッドボルトを使用して中大脳動脈(MCA)を閉塞することにより、ラットモデルで虚血性脳卒中を誘発するプロセスを示しています。この手順では、頸動脈を結紮し、外頸動脈にねじ山ボルトを挿入し、MCAから脳への血流を遮断してニューロン死を引き起こし、虚血性脳卒中を模倣します。

プロトコル

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動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ラットにおける片側中大脳動脈閉塞・再灌流モデル(MCAO/R)の確立

注:手術中は、血管の破損を防ぐためにマイクロ鉗子を優しく使用してください。血管が分離されているとき、ラットの首の神経や他の血管への損傷を避けてください。すべてのサバイバル外科的処置に適切な無菌技術を提示するように注意する必要があります。ビデオの後半で説明するテクニックは、手順全体を通じて実践する必要があります。

  1. 手術中は、小動物のサーモスタットでラットの体温を37.0±0.5°Cに保ちます。6cm 5-0縫合糸を4本用意します。
  2. 小動物麻酔器(排ガス処理装置付)の酸素流量を0.4−0.6L/min、イソフルラン濃度を5%としてください。ラットを麻酔器に入れます。
  3. 動物が気を失った後、ラットを外科用固定台に置きます。ラットの口を麻酔器のマスクに接続します(酸素流量は変わりません;イソフルランの濃度を3%に調整してください)。四肢の緊張の欠如、角膜反射、および痛みを観察することにより、動物が深い麻酔に入ったことを確認します。
  4. 紙の包帯(または他の道具)で手術台の上に横たわるように手足を固定します。
  5. 電気シェーバーでネックコートを取り外し、75%アルコールで滅菌します(ヨードフォアが適しています)。ネズミの口をフックで固定します。
  6. 眼科用ハサミで首の中央の縦形状に沿って2〜3 cm切ります。
  7. 総頸動脈を分離します。眼科用鉗子で皮下筋を分離します。自家製のリトラクターを使用して、視界を完全に露出させます。眼科用鉗子で気管の前筋を分離した後、総頸動脈が見えるまで右胸鎖乳突筋腱に沿って分離します。
  8. 総頸動脈、外頸動脈、および内頸動脈を眼鉗子で分離します。総頸動脈(ハードノット)、心臓端から遠い外部頸動脈(ハードノット)、および内部頸動脈(ルーズノット)を5-0縫合糸で結紮します。心臓端近くの外頸動脈を5-0縫合糸で裏打ちします。
  9. ねじ山ボルトを挿入します。眼ハサミを使用して外頸動脈に小さな開口部を切り取り、ねじ山ボルトをそっと挿入します。緩い結び目になっていた外頸動脈の縫合糸を結紮し、外頸動脈を切断します。
    1. 内頸動脈の緩い結び目を緩め、スレッドボルトを中大脳動脈の始まりに挿入し続けます(縫合糸マーク付き)。次に、露出したネジ山ボルトを切断します。
  10. 虚血時間(2〜3時間)に達した後、1つのマイクロ鉗子で外頸動脈の骨折を固定し、別のマイクロ鉗子でねじボルトを静かに引き出します。ねじ山ボルトの前端が内頸動脈から完全に引き抜かれたら、5-0縫合糸で裏打ちされた外頸動脈を結紮してから、ねじ山ボルトを完全に引き出します。
  11. 総頸動脈を緩め、感染を防ぐために傷口の表面に ~50,000 U のペニシリンナトリウム粉末を塗ります。皮下の筋肉と皮膚を4つの縫合糸で縫合します。
  12. ラットをケージに戻した後の術後の水不足を防ぐために、1 mL シリンジ (SQ-PEN 注射が望ましい) を使用して ~0.2 mL の滅菌生理食塩水をラットに経口投与します。

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開示事項

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利益相反は宣言されていません。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
解剖顕微鏡ライカ (ドイツ)S8微視的な操作機器
電気シェーバーShanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.3000#ネズミの首の脱毛
Image Pro Plusソフトウェア株式会社メディアサイバネティクス6梗塞の体積を解析する
イソフルランRWDライフサイエンス217170702麻酔ガス
マイクロ鉗子Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.10 cm血管マイクロマニピュレーション
マイクロシャーShanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.10 cm血管マイクロマニピュレーション
眼科用鉗子Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.10 cm補助皮膚と筋肉の解剖学
眼科用ハサミShanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.10 cm首の皮を切るのに使う
小動物麻酔器Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.ABM3000ガス麻酔器
小動物用サーモスタット北京大見達科技有限公司DM.7-YLS-20A手術中に動物の体温を一定に保つため
手術用ハサミShanghai Medical device Co., Ltd.16 cm斬首や脳の除去に使用
縫合糸Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd.4-0 / 5-0皮膚・筋肉縫合糸用/血管結紮用
スレッドボルト北京シノンテック株式会社2636/2838/3040/3043-A4ラットにおける中大脳動脈の閉塞

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